广东环凯微生物科技有限公司

一）整套试剂及用品
鉴定生化反应的10种试剂（表1）、10瓶0.85%无菌生理盐水、1瓶0.5 McFarland的浊度管、10支一次性吸管。二）西林瓶的使用方法开启西林瓶前，用75%酒精棉消毒西林瓶表面，在无菌条件下，按铝盖上的箭头方向打开铝盖，撕开铝盖，打开西林瓶胶塞（如左图）。所有的西林瓶在使用后均高压灭菌后方可弃去。三）副溶血性弧菌生化鉴定盒的详细使用方法副溶血性弧菌为革兰氏阴性无芽胞杆菌，易呈多形态，有棒状、弧状、卵圆状、球状、丝状等，排列不规则，一般大小为0.3～0.7µm×1～2µm，单端一根鞭毛，有动力，运动活泼，两端浓染，在固体培养条件下能生长周鞭毛。菌落常为隆起，圆形，稍浑浊不透明，表面光滑，湿润，不产生色素。挑取平板分离的可疑菌落划线接种3%NaCl胰蛋白胨大豆琼脂平板35－37℃培养18－24h，革兰氏染色镜检，并将新鲜菌苔置于已配备的无菌生理盐水中，与0.5 McFarland的浊度管比浊，将菌悬液制备成0.5McFarland ( 约10⁸cfu/mL )，用吸管吸取2滴（约0.06mL）菌悬液加入每种微量生化管内。将已接种的西林瓶再套上胶塞，一般采用全加塞（如右图左两瓶所示），特殊情况在下表注明采用半加塞（如右图右两瓶所示），直立于内托的凹槽内（如右图），或放置于合适的瓶架中，于35－37℃培养箱中培养，结果观察见表1。注意：如有特殊的接种方式、培养时间或培养方式，请详见每种生化鉴定管附带的使用说明。
表1

产品名称	结果判定		结果观察 时间（小时）	使用说明
	阳性	阴性
氧化酶试纸	红色	不变色		用玻棒挑取新鲜的培养物于氧化酶试纸表面，观察菌落颜色
3%NaCl三糖铁琼脂	产气有气泡， 产酸变黄色， 产硫化氢变黑色， 有动力扩散生长	无气泡， 不变色 无扩散生长	24	用接种针挑取新鲜菌苔穿刺，穿刺完毕后在斜面上划“之”字形接种，竖立培育。西林瓶半加塞（如图2右两瓶所示）后竖立培育。
无盐胨水、3％NaCl胨水、6％NaCl胨水、8％NaCl水、10％NaCl胨水	生长	不生长	24
3%NaCl甘露醇	黄色	紫色	8－24
3%NaCl赖氨酸脱羧酶	试验管蓝绿色， 对照管变黄	试验管与对照管均变黄	18－24	每株被检菌应同时接种氨基酸对照管一支，并加灭菌液体石蜡3－4滴覆盖培养基表面。培养18－24小时，未见阳性结果，继续培养4天，再做最终结果判定。
3%NaCl 葡萄糖磷酸盐胨水（V-P）	红色	不变色	48	西林瓶半加塞（如图2右两瓶所示）培养后依次加入8滴VP试剂甲液及4滴乙液，混匀，再培养10－20分钟观察结果。
β－半乳糖苷（ONPG）	深黄色	淡黄色或无色	12－24

备注：本鉴定盒是按照环凯产品目录中的品种成份从左到右的顺序摆放。 四）副溶血性弧菌的生化特性见表2 表2   副溶血性弧菌的生化性状

试验项目	结果
革兰氏染色镜检	阴性，无芽胞，呈棒状、弧状、卵圆状
氧化酶	+
3%NaCl三糖铁琼脂	底层变黄不变黑，无气泡，斜面不变色或红色加深，穿刺接种处扩散生长
无盐胨水	－或微弱生长
7% NaCl胨水	+
10％NaCl胨水	－或微弱生长
3%NaCl甘露醇	+
3%NaCl赖氨酸脱羧酶	+
V-P	－
onPG	－