政府检测机构为什么需要检测?
1、日益严峻的食品安全局势的需要 2、提高检测效率 3、节约人力资源成本 4、与国际接轨
企业为什么需要快速检测?
1、 销售环节要求快速出货,尤其是一些保质期短的产品 2、减少物流的压力,尽可能减少仓存,加快资金周转 3、约人力资源成本
对于运行HACCP(危害分析的临界控制点)质量保证体系的企业来说,快速检测方法可以快速检测原料及半成品的污染情况,以采取相应的措施控制最终产品的微生物超标情况。
最新事件
2013年12月厦门检验检疫局从一批进口美国黄玉米中检出未经中国农业部批准的转基因成分MIR162。该批玉米重5.81万吨,货值1582.1万美元,其含抗虫基因,能抵抗秋粘虫、甘蔗食心虫、玉米穗蛾以及其他鳞翅目害虫,。最终,这些玉米全部被退运处理。
2014年2月一家网站联合国内第三方检测机构——华测检测对市面上永和大王、麦当劳、7-11、肯德基四家的豆浆进行检测,发现肯德基的豆浆中含有转基因成分。
2014年3月韩国市面上进口芥花油被曝使用转基因(GMO)原料,消费者对韩国国内GMO标识制度提出质疑。
常规检测方法:
核酸检测:普通PCR、实时荧光PCR、巢氏PCR、竞争性PCR、基因芯片
蛋白质检测:ELISA、免疫试纸条、Western 印记
快速方法势在必行
国外许多政府检测机构都在大量使用快速检测方法,尤其是ATP法、免疫法、阻抗法和显色培养基法在国外应用相当成功,国内的许多政府检测机构也都已经在使用或正在考虑使用国外先进的快速检测技术。
快速检测方法:
免疫学方法中突出代表:胶体金免疫层析检测条
PCR方法:普通PCR,荧光PCR,实时荧光PCR(定量PCR)等多种方法
PCR方法一般不需增菌太长时间,通过PCR方法对待测微生物的特征片断进行扩增,然后通过凝胶电泳或荧光PCR技术判断结果,实时荧光PCR已经广泛用于微生物检测。
PCR-聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction, PCR)在体外通过酶促反应,进行一段特定DNA或RNA片段扩增的技术,是获取目的DNA片段的一项常规技术(诊断和检测)
原理:
1.变性(denaturation):
加热使DNA双螺旋的氢键断裂,双链解离形成单链DNA
2.退火(annealling):
温度降低时使引物和其互补的模板在局部形成杂交链
3.延伸(extension):
在DNA聚合酶和4种脱氧核糖核苷酸及Mg2+存在的条件下,催化DNA链延伸反应
荧光PCR技术(Real Time PCR)
荧光是响应于一个短波光的激发,一个长波长光被发射出来每个荧光分子都有一个最有效的激发波长,被激发的荧光分子越多,发射的荧光越强。
PCR + 荧光标记 + 监测系统
优点:
测定结果迅速,灵敏度和特异性高,可做到定量分析,既可以用于临床感染性疾病的诊断,又可用于监测其疗效。实时定量PCR 不需要PCR 后处理,所以可避免PCR 的实验室污染及减少检测耗时。
缺点:
其假阳性概率仍偏高,仪器设备要求高,使用成本高,难以实现现场大批量快速检测,现有检测方法不足。
PCR:耗时长操作复杂、成本昂贵、技术要求高
蛋白质检测:抗原抗体专一性要求高、加工产品不易检测、不适用与蛋白表达量低、或不表达的产品
荧光定量PCR(qPCR)技术是目前主流的分子检测技术。相关产品占据全球分子诊断市场约一半。
面临主要问题:
核酸检测过程复杂,对操作人员要求高,操作误差对结果影响大;实现核酸扩增信号检测设备价格高;对实验室硬件条件要求高;局限于高端市场、普及推广困难!基层医疗和检测机构需求得不到满足!
解决方案:
简易高效的核酸扩增新技术
简易高效的核酸扩增新技术
高效——检测时间可缩短至30min内完成
恒温——使操作变得简单,不在需要高端检测设备
结果易判断——对结果信号的检测变得简单
优势整合——检设备开发简单,大幅度降低成本,为技术推广创造全新空间
技术特征
反应体系:
具有链置换特性的DNA聚合酶、dNTP、适宜的缓冲液和模板DNA,能够识别靶DNA 7个特异序列的6 条引物
反应原理:
一种新型的等温扩增技术,即等温多自配引发扩增(isothermal multiple self-matching-initiated amplification,IMSA)。
IMSA恒温扩增方法特点
特异性强
6条引物对靶序列的7个特异序列区的识别,保证了IMSA扩增的高度特异性
等温高效
IMSA在等温条件下扩增,不会因温度改变而造成时间的损失,而且受非靶序列的影响小;与PCR相比,其检测极限更小,仅为几个拷贝
耗时短
在1 h内可完成检测
产物易检测
核酸染料,肉眼观察
操作简便
反应不需PCR仪和特殊试剂
具有于PCR技术同等甚至超越的优势
有望取代PCR技术
对仪器设备要求宽松
可实现现场大量样品的快速检测
IMSA反应条件
65℃ 反应 20至 60 min
反应结束后可用肉眼观察是否有浑浊沉淀产生,沉淀为反应产生的焦磷酸镁
结果检测
肉眼检测:
在IMSA的反应过程中,焦磷酸盐和镁离子结合生成焦磷酸镁白色沉淀物
可以直接根据是否形成白色沉淀来定性判断反应是否发生