近年来，在新型固相载体中，磁性微球不仅可以作为反应的固定相又可作为分离载体，与传统的酶标板载体相比，具有更大的比表面积，可使免疫反应从二维到三维立体反应，从而提高抗体与抗原的反应效率，同时具有可自动化操作等优势。来自河北农业大学理学院和北京市理化分析测试中心的王玲、管笛、周欣等人，将磁微粒替代酶标板作固定相，应用到化学发光技术中检测氯霉素以期获得灵敏高效的检测技术，同时也为实现自动化化学发光检测技术进行前期研究。
结果与分析
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羊抗鼠磁珠偶联物用量的优化
羊抗鼠磁珠偶联物用量对检测结果的稳定性和准确性有较大的影响。虽然磁珠用量0.5 μL时的偶联物化学发光值最高，但是此时的标准偏差较大，结果稳定性相对较差，因此选取1.0 μL偶联物为最佳磁珠用量。
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抗体与酶标物用量的优化
抗体用量对检测方法的灵敏度有较大的影响。抗体用量过多，会影响待测物的竞争效果，降低检测灵敏度；抗体用量过少，会使化学发光值过低，影响检测结果的稳定性。因此本研究分别对抗体和酶标抗原的用量进行了优化。基于磁微粒的化学发光法采用两种反应模式。
反应模式1：每孔加入100 μL样品/标准品溶液，50 μL氯霉素-HRP偶联物，50 μL氯霉素单克隆抗体溶液，1 μL羊抗鼠抗体-300 nm磁微粒偶联物，37 ℃反应20 min。然后用PBST清洗磁微粒3次。每孔加入100 μL化学发光底物，37 ℃反应10 min后进行发光测量。
反应模式2：每孔加入100 μL样品/标准品溶液，50 μL氯霉素单克隆抗体溶液，1 μL羊抗鼠抗体-300 nm磁微粒偶联物，37 ℃反应10 min后，再加入50 μL氯霉素-HRP偶联物，37 ℃反应10 min。然后用PBST清洗磁微粒3 次。每孔加入100 μL化学发光底物，37 ℃反应10 min后进行化学发光值测量。
在反应模式1中，当氯霉素-HRP的稀释度为2:5时，氯霉素添加量为0.5 μg/kg时具有最低抑制率，为47.3%。表明此时竞争反应效果最好，具有更高的检测灵敏度，选用此稀释度为最佳。在反应模式2中，氯霉素-HRP的稀释度为1:5时，竞争效果最好，灵敏度最高，选用此稀释度为最佳。
反应模式1中，当氯霉素抗体的稀释度为1:10 000时，氯霉素添加量为0.5 μg/kg时具有最低抑制率，为47.3%。表明此时竞争反应效果最好，具有更好的检测灵敏度，选用此稀释度为最佳。在反应模式2中，氯霉素抗体的稀释度为1:40 000时，竞争效果最好，抑制率为30.5%，灵敏度最高，因此选用此稀释度为最佳。
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猪肉样品中氯霉素添加回收率的测定
向空白猪肉样品中添加一定量的氯霉素标准品，添加量分别为0.1、0.5、1.0 μg/kg。经过提取回收，利用上述建立的磁性直接竞争化学发光法进行检测。结果见表3，实验回收率范围在85.24%～93.57%之间，相对标准偏差小于11.5%。由此可见，本实验建立的磁性化学发光酶免疫法具有良好的回收率，并证明磁珠作为承载体能够应用于猪肉样品中氯霉素的化学发光检测。
结 论
本实验建立了磁性化学发光酶免疫法检测猪肉样品中的氯霉素，该研究使用磁珠替代酶标板作为固定相，降低了空间位阻，使免疫反应进行的更加充分。通过磁珠用量、氯霉素-HRP量、抗体量和反应模式的优化，最终建立方法的检出限为0.013 μg/kg，线性范围为0.060～2.421 μg/L。猪肉样品添加回收实验表明，方法的回收率为85.24%～93.57%，相对标准偏差小于11.5%。综上，磁性化学发光酶免疫法应用于猪肉中氯霉素含量的检测，具备灵敏度高、准确度高、检测速度快等特点，可为自动化化学发光检测技术研究提供科学的参考依据。
