硫乙醇酸盐流体培养基
厌氧菌和需氧菌的培养
胰酪胨 ……………………………15.0g
氯化钠………………………………2.5g
酵母浸出粉…………………………5.0g
新配制的0.1% 刃天青溶液………1.0ml
无水葡萄糖…………………………5.0g
L-胱氨酸……………………………0.5g
琼脂 ………………………………0.75g
硫乙醇酸钠…………………………0.5g
(或硫乙醇酸) ………………… 0.3ml
水…………………………………1000ml
胰酪大豆胨液体培养基
真菌和需氧菌的培养
胰酪胨 ………………………………17.0g
氯化钠…………………………………5.0g
大豆木瓜蛋白酶水解物 …………… 3.0g
葡萄糖/无水葡萄糖 ……………2.5g/2.3g
磷酸氢二钾……………………………2.5g
水……………………………………1000ml
上述硫乙醇酸盐流体培养基或胰酪大豆胨液体培养基可在灭菌或使用前加入适宜的中和剂、灭活剂或表面活性剂,制成中和或灭菌用培养基。
0.5%葡萄糖肉汤培养基
抗生素的无菌检查
胰酪胨 ……………………………10.0g
氯化钠………………………………5.0g
牛肉浸出粉…………………………3.0g
葡萄糖………………………………5.0g
水…………………………………1000ml
胰酪大豆胨琼脂培养基
胰酪胨 …………………………15.0g
氯化钠……………………………5.0g
大豆木瓜蛋白酶水解物…………5.0g
琼脂 ……………………………15.0g
水………………………………1000ml
沙氏葡萄糖液体培养基
动物组织胃蛋白酶水解物
和胰酪胨等量混合物……………15.0g
葡萄糖……………………………20.0g
水………………………………1000ml
沙氏葡萄糖琼脂培养基
动物组织胃蛋白酶水解物
和胰酪胨等量混合物…………10.0g
葡萄糖…………………………40.0g
琼脂……………………………15.0g
水……………………………1000ml
加点料
同时,药典里也规定,无菌检查用的硫乙醉酸盐流体培养基和胰酪大豆胨液体培养基等应符合培养基的无菌性检査及灵敏度检査的要求。
灵敏度检查
1.菌液制备
接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至胰酪大豆胨液体培养基中或胰酪大豆胨琼脂培养基上,30~35℃培养18~24小时;
接种生孢梭菌的新鲜培养物至硫乙醇酸盐流体培养基中,30~35℃培养18~24小时;
接种白色念珠菌的新鲜培养物至沙氏葡萄糖液体培养基中或沙氏葡萄糖琼脂培养基上,20~25℃培养24~48小时。
上述培养物用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0. 9%无菌氯化钠溶液制成每lml含菌数小于100cfu(菌落形成单位)的菌悬液。
而黑霉菌的菌悬液制备则比较特殊:
接种黑曲霉的新鲜培养物至沙氏葡萄糖琼脂斜面培养基上,20~25℃培养 5~7 天,加入3~5m l含0.05% (ml/ml) 聚山梨酯80 的pH7.0无菌氯化钠—蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液,将孢子洗脱。然后,采用适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管内,用含0.05% (ml/ml) 聚山梨酯80的pH7.0无菌氯化钠—蛋白胨缓冲液或 0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含孢子数小于100cfu的孢子悬液
2.培养基接种
取每管装量为 12ml 的硫乙醇酸盐流体培养基7支,分别接种小于100cfu的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、生孢梭菌各2支,另1支不接种作为空白对照,培养3天;
取每管装量为9ml的胰酪大豆胨液体培养基7支,分别接种小于100cfu的枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉各2支,另1支不接种作为空白对照,培养5天。逐日观察结果。
3.结果判定
空白对照管应无菌生长,若加菌的培养基管均生长良好,判该培养基的灵敏度检查符合规定。
培养基的配制繁琐而耗时,因此现在市场上也有许多商品化培养基,为日常无菌检查提供了更加高效的基础条件。