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大肠杆菌噬菌体的分离鉴定

放大字体  缩小字体 发布日期:2018-03-30
核心提示:大肠杆菌噬菌体,是指寄生在大肠杆菌内的一种噬菌体,属于细胞病毒的一种。噬菌体还有一个特点就是具有专一性,一种噬菌体只在一种细菌中生活,而不能在另一种细菌中生活,人噬菌体是一种大肠杆菌的温和噬菌体,它是遗传工程中极好的载体分子,就是担当把动物的基因搬运进大肠杆菌细胞的搬运工角色。
   大肠杆菌噬菌体,是指寄生在大肠杆菌内的一种噬菌体,属于细胞病毒的一种。噬菌体还有一个特点就是具有专一性,一种噬菌体只在一种细菌中生活,而不能在另一种细菌中生活,人噬菌体是一种大肠杆菌的温和噬菌体,它是遗传工程中极好的载体分子,就是担当把动物的基因搬运进大肠杆菌细胞的搬运工角色。
 
  繁殖特点
 
  繁殖过程可以分为吸附、侵入、复制、合成与释放4步。
 
  (1)吸附。噬菌体以它的尾部末端高度特异性地吸附到敏感细胞表面上某一特定的位点,如细胞壁、鞭毛或纤毛。
 
  (2)侵入。将自身的遗传物质(DNA)注入宿主细胞内。
 
  (3)复制与合成。指噬菌体DNA和蛋白质外壳的复制。噬菌体DNA进入宿主细胞后,立即引起宿主的代谢改变,宿主细胞内的核酸不能按自身的遗传特性复制和合成蛋白质,而由噬菌体核酸所携带的遗传信息控制,借用宿主细胞的合成机构及酶等复制核酸,进而合成噬菌体的蛋白质。核酸和蛋白质装配合成新的噬菌体。
 
  (4)释放。噬菌体粒子成熟后,噬菌体的水解酶水解宿主细胞而使宿主细胞裂解,噬菌体被释放出来。
 
  大肠杆菌噬菌体并不会引起大肠杆菌所导致的一切病症。
 
  大肠杆菌噬菌体的分离鉴定
 
  1 噬菌体的分离及噬菌斑特征: 仔猪肠内容物样品过滤上清与大肠杆菌K-12菌株MC1061混合后,经双层琼脂平板法测定和纯化,37 ℃培养6 h后,在平板上能形成明显噬菌斑。噬菌斑呈圆形、大而透明且边缘整齐,呈现出裂解性噬菌体的噬菌斑特征。
 
  2 噬菌体的电镜观察: 纯化的噬菌体经磷钨酸负染后,在透射电镜下所观察到的形态如图 2所示。噬菌体vB_EcoS_SH2的头部呈二十面体立体对称,头部直径约50 nm,噬菌体含非收缩性尾部,宽约8 nm、长约120 nm。根据2012年国际病毒分类委员会第9次报告提出的噬菌体分类与命名标准,该噬菌体符合长尾噬菌体科(Siphoviridae)特征。
 
  3 噬菌体的裂菌谱: 通过平板裂解实验及点板实验(Spot test assay)检测噬菌体对实验菌株的裂解效果。结果发现,该噬菌体对大肠杆菌K-12菌株MC1061、MG1655和DM1187具有极强的裂解效果,形成明显的裂菌圈。对大肠杆菌O157菌株Min27,部分APEC和AFEC菌株,金黄色葡萄球菌ATCC25923和ATCC29213及猪链球菌HA9801均没有明显的裂解效果。
 
  4 噬菌体核酸类型鉴定: 噬菌体基因组经DNase Ⅰ、RNase A和Mung Bean Nuclease处理,核酸电泳鉴定结果显示,噬菌体SH2的基因组能被DNase Ⅰ完全降解,经RNase A处理后无明显变化,表明其基因组核酸为DNA。另外由于核酸不能被Mung Bean Nuclease降解,表明该噬菌体基因组为双链DNA (dsDNA) 。
 
 
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