通过对菌种保存周期内的不同时间节点菌种特征的确认结果，证明该菌种保存方法可以在实验室的储存条件、管理流程的条件下菌种依然具有菌种保存前的特性，在一定时间内可以使用。
二、验证对象
本文对验证过程和项目进行详细说明。
注：具体某个菌的特征特性，文末会列举部分参考文献，麻烦小主自行学习。
三、风险评估
这个验证过程的风险评估可以从操作过程的风险和项目设定的风险两方面进行，具体如何开展，各公司都有自己的要求，此处不多赘述了。
四、验证关键材料信息确认
1关键性材料信息登记
注：如我公司使用某厂家的磁珠菌种保藏管，厂家资料除说明书外，包括低温稳定性说明材料（包括简单的验证步骤），两个温度下保存一些常见微生物的存活率报告。
2仪器、器具及耗材清单
3其他器具材料
镊子、漩涡振荡器、锥形瓶，消毒剂等
五、验证过程
1菌种传代保藏
磁珠菌种保藏法操作步骤不再赘述，见下图：
（图片来自：CRYOBANK厂家说明书）
该操作过程可同时选用不同批号的磁珠菌种管同步进行三次或3批菌种冻干粉。
2验证周期及项目
磁珠菌种保藏管，-20℃一般至少可保存1年，依据厂家资料报告及法规，对应周期检验项目设定如下表：
注：关于项目和周期，可以通过基本的分析手段进行增减，表格中仅列举个人觉得需要进行的项目，除16S 和ITS外，在前文提及其他鉴别方式，可根据自身情况进行选择。需要提醒注意的是，药典要求必须进行纯度检查。
3验证操作
3.1. 外观检查：
检查菌种保存管外观，查看保存管是否出现破损、漏液、变形等情况，结果记录于检查表。
表格中分别填写检查结果及检查人、日期。
注：外观检查主要包括是否是否有破损污物、漏液、无法密封、变形（冷冻情况下液体未吸干可能出现）等，表格设计按照个人喜好进行
3.2. 表型鉴别（对纯度进行简单判定？）
检查参照《中国药典》（2015）四部9204微生物鉴定指导原则中菌落形态进行判定：
注：?为具体菌的特性要求，表格中不涉及内容可直接删除，。。。为表格列举不完整，详见药典9204微生物鉴定指导原则。
按照以上项目在验证周期内对菌种进行相应的鉴别，鉴别过程记录均应保存，除仪器使用记录外，其他记录均需复印放置于验证方案中，作为验证报告汇总依据。
3.3. 菌液计数
检查参照《中国药典》（2015）四部，1105或1106中，菌液制备方法进行。规定具体的传代方法和培养时间，以及培养基种类等关键因素，进行计数，针对计数结果，在验证结束后，进行统计学分析，证明无明显下降或异常趋势即可。
3.4. 生化反应
序号菌种名称反应类型结果判定
1??菌产酸，产气。。。???
注：生化反应为表观鉴别的一种，也是菌种鉴别主要一环，故此处单独列出进行鉴别。且目前市场上，有很多成熟的采用生化反应的方式进行菌种鉴别的试剂条，就药厂而言，购买试剂条可避免很多生化试剂的购买、配制和管理的麻烦。
3.5. 16S/ ITS
16S rRNA基因是细菌上编码rRNA相对应的DNA序列，存在于所有细菌的基因组中。
ITS（Internal Transcribed Spacer）鉴定是指对ITS序列进行DNA测序，通过将测序得到的ITS序列与已知真菌ITS序列比较，从而获得未知真菌种属信息的一种方法。
英文：Internal Transcribed Spacer Identification
3.6.人员干预计划
人员干预计划根据日常菌种使用情况进行，我们每天使用菌种保存管，使用过程要求使用冰盒进行保温，干预计划要求则要求人员每天按照日常操作流程进行干预，注意控制时间。
注：该项工作操作过程需要结合日常，所以在起草公司操作规程时，需要考虑验证方案中规定的内容。
4操作注意事项
4.1.如果日常使用过程中不采用每日制备新鲜菌液的使用方式，则可按照日常使用过程进行设计和干预。
4.2.应对厂家提供的关键性能参数进行验证，如某品牌磁珠菌种保藏管，会提供在常温放置多久菌种不变形的验证资料，其中包括验证关键操作步骤。
4.3.该项目进行过程中，尤其需要注意避免污染和交叉污染，特别是那些会形成孢子容易污染环境的菌种，可进行隔离操作，详细内容在上篇中有所提及。
4.4.过程中所有的操作均需要有严格的培训和执行，发生的所有异常均需进行详细的调查，需要证明异常和污染的来源，避免徒劳无功。
五、验证支持性材料复印件
附件1.磁珠菌种保藏管厂家证书及相关验证文件报告
附件2.操作过程中使用设备容器等计量/验证证书
附件3.一次性产品厂家检验报告
附件4.菌种相关证明材料
附件5.培养基适用性检查记录
END
写在文末的话
1
针对本验证，提供几个可参考的书籍和法规，希望能够对大家有帮助.
●《微生物的鉴别与图谱》主编，徐仕国
●《药品微生物学检验分析手册》主编苏德模
●《微生物培养基质控与图解》主编：纪绍梅，严德喜
2
关于验证周期较长的问题，有个行知有效的办法，该验证进行阶段性验证总结的方式，三个月一次进行总结报告，三个月完成可按照操作起草操作规程，文件中效期以已出报告效期为准，待一年验证结束后，进行汇总报告，将验证有效期根据验证结果变更为一年。可以避免验证未结束方法不可使用的情况。
或者依据厂家报告，进行风险评估，暂定一年，验证同步进行
