大肠菌群并非细菌学分类命名,而是卫生细菌领域的用语,它不代表某一种或某一属的细菌,而指的是具有某些特性的一组与粪便污染有关的细菌。这一群细菌包括埃希菌属、枸橼酸菌属、肠杆菌属(又叫产气杆菌属,包括阴沟肠杆菌和产气肠杆菌)、克雷伯菌属中的一部分和沙门菌属的第Ⅲ亚属(能发酵乳糖)的细菌。
本检验方法所检测的大肠菌群计数是指在被检样品的单位重量（g)或体积(mL),在一定的培养条件下能发酵乳糖、产酸产气的需氧或兼性厌氧革兰阴性无芽孢杆菌。最大可能数计数法(Most Probable Number.MPN)适用于大肠菌群污染较低的食品,根据待测样品经系列稀释并培养后,根据其未生长的最低稀释度与生长的最高稀释度。用统计学概论推算出待测样品中大肠菌落的最大可能数。平板计数法适用于大肠菌群污染较高的食品。然而具体使用哪种方法主要依据检验目的和食品安全相关标准的规定。
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质量控制
1.实验过程中,每批样品稀释液都要做空白对照。如果空白对照平板上出现
菌落时,应度弃本次实验结果,并对稀释液、吸管、平皿、培养基、实验
环境等进行污染来源分析。
2.为了控制环境污染,在毎次检验过程中,于检验工作合上打开两块计数凉
脂平板,并在检验环境中暴属不少于15分钟、将此平板与本批次样品同
时进行培养,以掌握检验过程中是香存在来自检验环境的污橤。
3.定期使用大肠埃希菌ATOC25922或相应定量活菌参考品,在P2实验室或
阳性对照实验室内,用适当的食品样品进行阳性对照实验验证,并进行记
录。此验证实验至少每2个月进行一次
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操作要点与注意事项
1.取样和稀释:样品前处理一定按照要求进行取样、混匀和稀释,确保结果的准确性。
2.培养基检查:加入样品前应观察倒管内是否有气泡,若有,应适当倾斜试管,让气体释放出来。
3.结果观察:某些食品样品可能会堵塞小倒管底部,影响倒管内气泡的观察,可将试管微微倾斜,用手指轻轻弹一下管壁,观察是否有一串小气泡沿着管壁升起,若有,则可判定产气。
4.检验时间掌独:从一个样品取样到倾注琼脂平板,应在15分钟内完成。因此,同时进行多个检样操作时应进行统筹安排。
5.检验中所使用的实验耗材,如培养基、稀释液、平皿、吸管等必须是完全灭菌的,如重复使用的耗材应彻底洗涤干净,不得残留抑菌物质。
6.本方法中,稀释液虽可使用生理盐水或酸盐缓冲液,但在具体检验过程中建议使用磷酸盐缓冲溶液,原因是磷酸盐缓冲溶液能更好地纠正食品样品中pH变化,对细菌具有更好的保护作用
7.在进行样品的10倍稀释过程中,吸管应插入检样稀释液液面2.5厘米以下，取液应先高于1mL,而后将吸管尖端贴于试管内壁调整至1ml，这样操作不会有过多的液体粘附于管外。而后将1mL液体加入另一9mL试管内时应沿管壁加入, 不要触及管内稀释液，以防吸管外部贴附的液体混入其中影响测结果。
8.将1mL样品匀液或稀波加人平皿内时应从平皿的侧面加入、不要将整个平皿盖揭去,以防止污染。
9.倾碟后将检样与琼脂混合时,可将平皿底在平面上先向一个方向旋转3~5次。然后再向反方向旋转3~5次,以充分混匀。旋转过程中不应力度过大,避免琼脂飞溅到平皿上方;混匀过程也可使用自动平皿旋转仪进行。
10.本方法移液时可使用可连接吸管的电动移液器,在使用过程中,一旦液体进入电动移液器滤膜中,应立即对滤膜进行更换,以防止污染。
11.当对易产生较大颗粒的样品(如肉类)进行检测时,建议使用带滤网均质袋,以方便均质后用吸管吸取匀液。
12.鉴于微量移液器移液头较短,为控制污染,在匀液移液过程中不宜使用。
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疑难解析
问题1、 本方法所检出的大肠菌群是否为单位食品中含有某一种或某一属细菌?
大肠菌群并非细菌学分类命名,而是卫生细菌领域的用语,它不代表某一种或某一属的细菌、而指的是具有某些特性的一组与粪便污染有关的知菌。这一群细菌包括埃希氏菌属、枸橼酸菌属、肠杆菌属(又叫产气杆菌属,包括阴沟肠杆菌和产气肠杆菌)、克雷伯菌属中的一部分和沙门菌属的第Ⅲ亚属(能发酵乳糖)的细菌。
问题2 、MPN和平板计法的选择?
大肠群污染较低的食品使用MPN法,根据待测样品经系列将释并培养后,根据其未生长的最低稀释度与生长的最高稀释度,用统计学概率论推算出特测样品中大肠菌落的最大可能,污染较高的食品使用平板计数法。
问题3、 部分实验结果在MPN表中无法找到MPN值，如阳性管数为122、123、232、223，如何做?
可增加稀释度(可做4~5个稀释度),使样品的最高稀释度能达到获得阴性终点（如果污染程度不能判定,则多加一稀释度），然后再遵循相关的规则进行查找,最终确定MPN。
问题4 、 方法中规定,每个平皿平板计数培基的使用体积是15~20mL,培养基体积的变化是否影响计数结果?
经过实验室验证,培养基体积在15~20mL范图内变化不会影响计数结果。
