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常见微生物污染

放大字体  缩小字体 发布日期:2019-04-08
核心提示:首先,我们要知道体外细胞污染可分为3 类: 物理性、化学性、生物性污染。其中生物性污染常见且造成的后果也较为严重,常见的生物污染类型有细菌污染、真菌污染、支原体污染、黑胶虫污染、原虫污染等。
   首先,我们要知道体外细胞污染可分为3 类: 物理性、化学性、生物性污染。其中生物性污染常见且造成的后果也较为严重,常见的生物污染类型有细菌污染、真菌污染、支原体污染、黑胶虫污染、原虫污染等。
 
  细菌污染:
 
  细菌污染特点为污染速度快,易被发现。细菌污染后,PH 值改变。细菌在普通倒置显微镜下为黑色细沙状,根据感染细菌的不同,可有不同的外形,培养液一般1~2天会浑浊变黄,对细胞生长影响明显。
 
  解决方法:对于不是很珍贵的细胞,可丢弃。
 
  若是很珍贵的细胞,建议分别配置含10倍双抗的PBS和5倍双抗的完全培养基各一份.先用10倍双抗的PBS洗涤细胞5-10次.然后用5倍双抗的完全培养洗涤细胞3次以上,并在其后每培养1小时换液一次,最后2倍双抗培养基培养过夜,第二天换成一倍双抗完全培养基继续培养,传代一次以上,如未发现污染,即可冻存,并留出部分细胞继续采用无双抗培养基培养48小时以上,最终确定细胞不含有任何污染物。
 
  霉菌污染:
 
  培养液清亮,倒置显微镜下无杂质,37度孵箱培养2-3天,仍清亮,细胞仍可生长。但出现絮状杂质,污染后的镜下特点为: 低倍镜下可见乳白色的团状漂浮物,培养液无变化; 高倍镜下可见明显的菌丝,细胞活力变差,生长速度明显变慢,甚至死亡。污染的主要来源为实验人员( 实验服)。
 
  解决方法:霉菌污染初期,将污染的细胞培养液慢慢吸出,用Hanks 液清洗细胞及瓶壁2-3次,加入含有以下抗生素的培养液,即青霉素100单位/ml,链霉素100 单位/mL,两性霉素 10mg/L,24h 后观察换液,若仍有菌丝可重复上述步骤进行处理,2-3次后就基本得到控制。但此种方式处理后对细胞的生长影响也较大。
 
  但细胞一旦污染,很难挽救,制霉菌素或放线菌素D或双抗都于事无补,建议舍弃该污染细胞。,将环境彻底消毒
 
  支原体污染:
 
  常见的污染现象,特点为短期无变化,具有隐蔽性。它们可以与细胞长期共存,培养基一般不发生浑浊,细胞无明显变化。污染后镜下特点: 在光镜下常可见到细胞核及胞浆内出现大小不等的颗粒或空泡。污染的主要来源为血清。而支原体是牛血清中最常见的微生物之一。
 
  解决方法:支原体污染细胞后,特别是重要的细胞株,有必要清除支原体。要注意的是:支原体没有细胞壁,故作用于细胞壁生物合成的抗生素,如内酰胺类、万古霉素等是不敏感的; 所以主要的清除方法有抗血清处理法、高温处理法、巨噬细胞清除法、选择性杀灭哺乳动物类细胞培养物中支原体的方法,其中巨噬细胞清除法效果较好。
 
  巨噬细胞吞噬法:从动物腹腔采取巨噬细胞,为排除其它细胞成分,可先进行纯化,然后再加入被支原体污染的细胞培养液中混合培养。在培养过程中,为检查支原体是否已被消除干净,可利用支持物培养法验证,取出支持物逐日染色、镜检观察,至支原体已被消除干净为止。
 
  黑胶虫污染:
 
  可以穿透滤膜,也可以通过空气传播,低倍下为黑色点状,高倍下可看见黑色的小虫游来游去。常常是细胞生长状态良好,且观测到的运动物无明显增多,且培养液颜色、透明度无明显变化。其污染特点为开始对细胞无影响,当数量达到一定程度时就会对细胞产生影响。污染主要来源于血清。
 
  解决方案:对细胞生长状态不会有明显影响,在细胞增殖旺盛之后会自然消失,除更换血清外无须特殊处理。建议如果细胞有可能是此种污染的话,可以增加细胞的种板密度,以提高细胞的生存率。
 
  细胞交叉污染:
 
  由于细胞培养操作时各细胞株所需的器材和溶液没有严格分开,往往会使一种细胞被另一种细胞污染。镜下可发现细胞的形态发生改变,与正常该细胞株的形态不同。
 
  解决方案:若发生细胞的交叉污染,通常不能挽回,只能放弃细胞。为避免细胞的交叉污染,在进行多种细胞培养操作时,所用器具要严格区分,最好做上标记便于辨别,并按顺序进行操作,避免一起进行时发生混乱,以免把细胞带到培养液中污染其他细胞。
 
 
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