首先要做好的事情就是配置好流动相，
流动相选择得是否合理，配置得是否正确，
直接关系到实验的成功与否。
流动相，是液相色谱中用于携带试样以及展开或洗脱组分的液体。在选择和配置方面都有一定的要求和需要注意的事项。
流动相的选择：
1.流动相应不改变填料的任何性质：
低交联度的离子交换树脂和排阻色谱填料有时遇到某些有机相会溶胀或收缩，从而改变色谱柱填床的性质。
碱性流动相不能用于硅胶柱系统。酸性流动相不能用于氧化铝、氧化镁等吸附剂的柱系统。
2.纯度：
色谱柱的寿命与大量流动相通过有关，特别是当溶剂所含杂质在柱上积累时。
3.必须与检测器匹配：
使用UV检测器时，所用流动相在检测波长下应没有吸收，或吸收很小。当使用示差折光检测器时，应选择折光系数与样品差别较大的溶剂作流动相，以提高灵敏度。
4.粘度要低（应<2cp）：
高粘度溶剂会影响溶质的扩散、传质，降低柱效，还会使柱压降增加，使分离时间延长，最好选择沸点在100℃以下的流动相。
5.对样品的溶解度要适宜：
如果溶解度欠佳，样品会在柱头沉淀，不但影响了纯化分离，且会使柱子效率降低。
6.样品易于回收：
应选用挥发性溶剂。
配置方法：
高效液相色谱法中的流动相主要用水性溶剂、有机溶剂或它们的混合液，水性溶剂也常用于缓冲液。
一般来说，溶剂的混合按体积比（V/V）或重量比（W/W）进行。溶液的体积因温度而变化，所以按重量比混合可调制再现性较好的混合溶剂，但由于操作较麻烦，通常多用体积比混合。
只要没有特别标明，就可按体积比进行混合，但在特殊情况下，如，胺类粘度高的溶液混合时，有时用重量—体积比（W/V）的方法。
在常见的反相液相色谱中，流动相的极性大于固定相的极性，溶质按照疏水性的大小不同进行分离。
极性越大或疏水性越小的溶质，与非极性的固定相的结合越弱，相对更容易被洗脱。所以，通过改变流动相的组成，可以有效改变分离的选择性。
目前实验室最常用的反相色谱流动相，通常以水为基础，加入一定量的能与水互溶的有机极性溶剂。
在多元液相色谱系统中，我们往往将流动相分为水相和有机相并通过灵活调节各个流动相的比例来改进分离或调整出峰时间。
流动相是色谱纯
由于液相色谱是一种相对精密程度比较高的仪器，所以流动相的“干净”与否，对于你能不能获得准确的数据以及液相的高效运行至关重要。所以，我们一般要求，液相色谱所用的试剂要使用高纯度的专用试剂，比如说色谱纯试剂。
色谱纯是指专用于色谱分析的标准试剂，其在低波长处的透光率比较好，在色谱条件下只出现指定化合物的峰，不出现杂质峰。当然在要求不太严格时，优级纯甚至分析纯的试剂也能用。
在条件允许的情况下，能用色谱纯就不要用其他的！
需要明白的是，优级纯的试剂纯度也是很高的，色谱纯不一定就比优级纯杂质少，但是对于色谱分析中常用的是紫外检测器，因此，从降低基线噪音和提高分析灵敏度上来考虑，应该使用紫外吸收小且杂质含量少的色谱纯试剂。
按照国家标准，根据试剂中所含杂质的多少，划分为三个等级国对比如下：
实验试剂(LR：Laboratoryreagent)，又称四级试剂。
流动相的过滤、脱气
由于流动相中任何尘埃或杂质微粒等都会磨损柱塞、密封环、缸体、单向阀等部件，同时，微粒也可能会堵塞泵口、柱头等，使柱压升高、柱效降低。因此要预先除去流动相中的固体微粒，而最常用的方法就是过滤。
通常情况下，我们会采用0.22或0.45微米滤膜进行过滤，需要注意的是，有机和无机需要分开过滤并使用对应的滤膜。如果你用无机滤膜过滤有机溶剂，那么你就可能看到膜溶解后的样子。
对于色谱纯试剂是否需要过滤这个问题，通常会存在一些争议。理论上，色谱纯在出厂时已经经过0.22微米膜过滤，是可以直接使用的。但是实际操作过程中，也有很多人为了保险起见，选择再过滤一下。
除了过滤之外，流动相在使用前必须脱气，以尽可能的除去溶解在流动相中的气体。否则这些气体会使柱填料的性能降低，还能够对检测器的信号产生很大的干扰。
脱气有多种方法，如超声脱气、真空脱气、氮气脱气等。当然，最常见的还是超声脱气。
流动相的pH值
采用反相色谱法分离弱酸（3≤pKa≤7）或弱碱（7≤pKa≤8）样品时，通过调节流动相的pH值，以抑制样品组分的解离，增加组分在固定相上的保留，并改善峰形的技术称为反相离子抑制技术。
对于弱酸，流动相的pH值越小，组分的K值越大，当pH值远远小于弱酸的pKa值时，弱酸主要以分子形式存在；对弱碱，情况相反。
分析弱酸样品时，通常在流动相中加入少量弱酸，常用50mmol/L磷酸盐缓冲液和1%醋酸溶液；分析弱碱样品时，通常在流动相中加入少量弱碱，常用50mmol/L磷酸盐缓冲液和30mmol/L三乙胺溶液。
注：流动相中加入有机胺可以减弱碱性溶质与残余硅醇基的相互作用，减轻或消除峰拖尾现象。
使用在注意事项：
1.流动相不能走空
液相色谱一旦开始测样，我们就要留心防止溶剂瓶内的流动相被用完，也就是要让滤头一直浸没再流动相的液体里。否则就会造成空泵运转，对柱塞、缸体或密封环产生磨损，最终产生漏液。
同时，流动相走空对色谱柱的伤害也是巨大，流动相走空时间长的话，色谱柱内长时间地处于没有溶剂的状态，就容易造成内部填料坍塌，导致色谱柱报废。
2.停泵后清洗系统
液相色谱使用后，一定要及时进行清理。当样品测完之后，流动相，尤其是含有缓冲液的流动相不能保留在液相系统内，尤其是在停泵过夜或更长时间不用的情况下。
如果将含有缓冲盐的流动相留在色谱泵内，就可能析出盐的微细晶体，这些晶体将损坏密封环和柱塞等。因此，必须及时清洗后，再换成合适的溶剂保存。
3.流动相最好现用现配
在日常使用中，还需要注意的是，流动相最好现用现配。尤其是水相溶剂，必须及时更换。对于水相溶液来说，虽然大都经过了杀菌处理，但是细菌的生命力很顽强，在适当的温度和光照情况下，很快就会活跃起来，不及时更换就会造成小编最近遇到的滤头长毛事故。而有机相，虽然不会发生细菌污染，但是有机相容易发生聚合，瓶子里就会出现一些絮状的聚合沉淀物。
当然，除了上述注意事项之外，流动相在使用中还有很多细节需要注意，希望大家在日常实验中多多留意，毕竟，在实验压力很大的时候，能避免出错的地方就一定要避免。
