来自吉林大学食品科学与工程学院的张燕、胡榕、郑健和刘静波*等人以蛋清源活性肽WNWAD及其结构改造肽为研究对象，考察了其对H2O2诱导损伤的HEK293细胞的存活率、ROS水平、抗氧化酶活力及细胞因子白介素8（IL-8）分泌的影响。
1、蛋清源活性肽对HEK293细胞的毒性
实验组和对照组细胞存活率无显着性差异，蛋清源活性肽对HEK293细胞既无促进生长作用，也无毒性或抑制生长作用，蛋清源活性肽本身对实验结果无干扰作用。
2、蛋清源活性肽对H2O2诱导的HEK293细胞氧化损伤的影响
WNWAD、WNW、WAD和WN均有氧化应激抑制作用。只加H2O2处理的损伤组细胞存活率约为对照组的（49.8±2.0）%，与对照组有极显着性差异（P＜0.01）；蛋清源活性肽WNWAD、WNW、WAD、WN对细胞存活率的影响均呈现出浓度依赖性，细胞存活率从损伤组的（48.0±2.4）%分别提高到（99.7±1.8）%、（69.4±3.2）%、（78.9±5.1）%、（72.1±3.6）% ，与损伤组有极显着性差异（P＜0.01），即随着蛋清源活性肽浓度的增大，其抑制氧化应激的活性随之增强，对氧化损伤细胞的保护作用也越强，尤其在五肽WNWAD浓度为1.0 μmol/L和2.0 μmol/L时，实验组的细胞在其保护作用下，存活率（（99.9±2.5）%、（99.7±1.8）%）几乎完全恢复到对照组的水平。结合细胞毒性实验结果可以证明，蛋清源活性肽对H2O2诱导损伤的HEK293模型细胞的保护作用是通过抑制氧化应激实现的，而非刺激HEK293细胞增殖。
3、蛋清源活性肽对H2O2诱导的HEK293细胞内ROS水平的影响
本实验中HEK293细胞经H2O2处理后DCF荧光强度显着升高（P＜0.01），说明H2O2诱导了HEK293细胞内ROS的产生。而经过蛋清源活性肽处理的实验组，与损伤组相比，细胞内ROS的水平极显着降低（P＜0.01），呈浓度依赖型关系。0.1 μmol/L和1.0 μmol/L的WNWAD、WNW、WN和WAD均显着降低了DCF荧光强度。
4、蛋清源活性肽对H2O2诱导的HEK293细胞中SOD、CAT和GSH-Px活力的影响
本实验中，HEK293细胞经过H2O2处理后，T-SOD、CAT和GSH-Px的活力和对照组相比，均极显着性下降（P＜0.01），在经过WNWAD、WNW、WAD、WN处理的实验组，随着肽浓度的升高，3 种酶的活力均有所提高，呈现浓度依赖型关系。在活性肽的浓度为1.0 μmol /L时，WNWAD的T-SOD、CAT和GSH-Px的活力分别为（176.25±1.98）、（21.03±1.52）U/mg和（37.36±4.17）nmol/（min·mL）；WNW的T-SOD、CAT和GSH-Px 的活力分别为（162.25±3.14）、（17.22±1.93）U /mg和（33.14±2.76）nmol/（min·mL）；WN的T-SOD、CAT和GSH-Px的活力分别为（141.39±2.22）、（16.85±0.97）U/mg和（32.19±2.62）nmol/（min·mL）；WAD的T-SOD、CAT和GSH-Px 的活力分别为（157.32±1.98）、（19.74±3.78）U /mg 和（35.69±1.24）nmol/（min·mL），较对应损伤组的酶活力均有极显着提高（P＜0.01）。
5、蛋清源活性肽对H2O2诱导的HEK293细胞内IL-8的影响
本实验中HEK293细胞经H2O2处理后，IL-8质量浓度较对照组细胞升高，差异具有显着性（P＜0.05），加入1.0 μmol/L的蛋清源活性肽WNWAD、WNW、WN、WAD后，细胞中IL-8质量浓度不同程度地降低。蛋清源活性肽对于IL-8的分泌有一定的抑制作用。
结 论
蛋清源活性肽对HEK293细胞存活率的影响极显着（P＜0.01），不同浓度蛋清源活性肽WNWAD、WNW、WAD、WN作用于氧化损伤的HEK293细胞后，其存活率明显提高，呈现浓度依赖性；其中1.0 μmol/L蛋清源活性肽WNWAD、WNW、WAD、WN处理细胞后，存活率从损伤组的（48.0±2.4）%分别提高到（99.7±1.8）%、（69.4±3.2）%、（78.9±5.1）%、（72.1±3.6）%，与损伤组有极显着性差异（P＜0.01）；H2O2诱导HEK293细胞内ROS的产生，经过活性肽预处理后细胞内ROS的水平极显着降低（P＜0.01）；随着蛋清源活性肽WNWAD、WNW、WAD、WN浓度的升高，总超氧化物歧化酶、过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶3 种酶的活力均有所提高，呈现浓度依赖型关系。最后利用酶联免疫吸附测定试剂盒测定了HEK293细胞中IL-8的分泌量，经过H2O2处理的HEK293细胞上清液中IL-8含量极显着升高（P＜0.01），加入WNWAD、WNW、WN、WAD后，细胞中的IL-8含量均有所降低，其中WNWAD和WN影响显着（P＜0.05）。以上结果显示蛋清源活性肽对降低HEK293细胞氧化应激水平和提高细胞抗氧化能力有积极的影响。
