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PCR应注意的小细节

放大字体  缩小字体 发布日期:2019-07-14
核心提示:PCR应注意的小细节
   1、 如果枪头有残留,当然会影响结果。首先可以考虑换好一点的
 
  进口枪头。其次,可以在加样的时候将枪头恰好伸入PCR反应管的液面下一点,然后将液体缓缓打入液面下,至恰好打出一个小气泡为至。
 
  2、 引物和模板和体系所加的比例要合适,模板过量会抑制体系的
 
  反应。
 
  3、 加样过程最好在冰块上操作。
 
  4、 PCR产物的电泳检测时间一般为48h以内,有些最好于当日电
 
  泳检测,大于48h后带型不规则甚至消失。
 
  5、 使用一次性吸头,严禁与PCR产物分析室的吸头混用,吸头不要
 
  长时间暴露于空气中,避免气溶胶的污染。
 
  6、 避免反应液飞溅,打开反应管时为避免此种情况,开盖前稍离心
 
  收集液体于管底.若不小心溅到手套或桌面上,应立刻更换手套并用稀酸擦拭桌面。
 
  7、 操作多份样品时,制备反应混合液,先将dNTP、缓冲液、引物和
 
  酶混合好,然后分装,这样即可以减少操作,避免污染,又可以增加反应的精确度。
 
  8、 移液枪用完之后要归到最大计量的位置,防止久而久之弹簧失
 
  去弹性。
 
  9、 冻结制品融解后请上下颠倒轻轻均匀混合,避免振荡器等剧烈
 
  搅拌。
 
  10、 加入试剂之前,把它混匀一下,以免放置时间长了浓度不均。
 
  11、 如凝胶分析扩增产物只有一条带,不需要用凝胶纯化。如可见
 
  其他杂带,可能是积累了大量引物的二聚体。少量的引物二聚体的摩尔数也很高,这会产生高比例的带有引物二聚体的克隆,而非目的插入片
 
 
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