沈阳农业大学食品学院的曹雪妍、刘 瑛、岳喜庆*等人利用非标记定量糖蛋白质组学技术，分析了不同泌乳期牛乳（牛初乳和牛常乳）乳清N-糖蛋白质的组成及其糖基化位点差异表达情况，并利用生物信息学手段，分析了牛乳乳清N-糖蛋白的功能，为评价和改善牛乳品质、研发婴幼儿配方乳中糖蛋白质的改良及功能食品的生产提供理论依据。
1、牛乳N-糖蛋白的质谱鉴定结果
在牛初乳和牛常乳乳清部分共鉴定到154 个N-糖蛋白和246 个糖基化位点，其中，牛初乳中鉴定到117 个N-糖蛋白和183 个糖基化位点，牛常乳中鉴定到109 个N-糖蛋白和145 个糖基化位点。牛初乳和牛常乳共同鉴定到62 个N-糖蛋白和82 个糖基化位点；牛初乳单独鉴定到55 个N-糖蛋白和101 个糖基化位点；牛常乳单独鉴定到37 个N-糖蛋白和63 个糖基化位点。
2、糖基化位点分析
牛乳中鉴定到的N-糖蛋白含有1～8 个糖基化位点，其中104 个N-糖蛋白（67.5%）含有1 个糖基化位点，30 个N-糖蛋白（19.5%）含有2 个糖基化位点，10 个N-糖蛋白（6.5%）含有3 个糖基化位点，3 个N-糖蛋白（1.9%）含有4 个糖基化位点，7 个N-糖蛋白（4.4%）含有5 个及以上糖基化位点。这与人乳和牛乳乳清N-糖蛋白糖基化位点分布情况相似。
3、牛初乳、牛常乳差异表达N-糖蛋白
初乳和常乳中共有106 个糖蛋白的137 个特异性表达糖基化位点，其中初乳中鉴定到64 个糖蛋白的85 个特异性表达糖基化位点，常乳中鉴定到46 个糖蛋白的52 个特异性表达糖基化位点。综合考虑定量差异及有无差异，初乳和常乳乳清中共鉴定到129 个糖蛋白的190 个差异表达糖基化位点，其中70 个糖蛋白在初乳中上调，49 个糖蛋白下调，10 个蛋白既有上调又有下调糖基化位点。
4、差异表达N-糖蛋白的GO功能注释分析
牛乳乳清差异表达糖蛋白参与的生物学过程是生物调节（24.5%）、刺激性反应（22.8%）、多细胞生物过程（15.2%）、定位（14.1%）、免疫系统过程（9.3%）、多生物过程（7.2%）和生物黏附作用（6.9%）；这些差异表达糖蛋白主要分布为细胞外区域（29.8%）、细胞器（25.9%）、细胞外区域部分（24.3%）和膜（17.4%），少量蛋白分布在细胞外基质（2.6%）；差异表达糖蛋白主要的分子功能是结合作用（47.6%）、催化活性（21.0%）、分子功能调节（11.9%）和转运活性（8.4%），此外还有分子转导活性、信号转的活性、结构分子活性和抗氧化活性。
5、差异表达N-糖蛋白的KEGG通路分析
包括补体与凝血级联、金黄色葡萄球菌感染、溶酶体、PI3K-Akt信号通路、吞噬作用、细胞外基质受体相互作用、肺结核、百日咳、造血细胞谱系、糖胺聚糖和其他聚糖降解。结合人乳乳清N-糖蛋白的研究与本研究发现，人乳乳清差异表达N-糖蛋白参与的KEGG代谢通路与牛乳乳清差异表达N-糖蛋白均参与了补体与凝血级联、金黄色葡萄球菌感染、溶酶体、PI3K-Akt信号通路、吞噬作用、细胞外基质受体相互作用和肺结核通路，说明牛乳与人乳乳清蛋白N-糖基化的部分功能具有重叠。
结 论
采用糖蛋白质组学技术，对不同泌乳期牛乳乳清N-糖蛋白的组成及其糖基化位点进行鉴定和差异分析，发现与常乳相比，初乳含有更多的糖蛋白，而且一些蛋白含有更多的糖基化位点。基于非标记定量，在牛初乳和牛常乳中鉴定到129 个糖蛋白的190 个差异表达糖基化位点。生物信息学分析表明，不同泌乳期牛乳乳清差异表达N-糖蛋白与不同泌乳期人乳乳清差异表达N-糖蛋白的GO功能注释和参与的KEGG代谢通路部分重叠，说明牛乳作为生产婴幼儿配方乳的主要原料，其乳清差异表达糖蛋白的某些功能与人乳乳清是相似的，可以提供一些与免疫和生长发育相关的糖蛋白，并参与到补体与凝血级联、吞噬作用和溶酶体等重要代谢通路中。本研究对蛋白质糖基化进行深入的研究，不仅丰富了乳N-糖蛋白质组成及其糖基化位点的相关信息，还阐明了不同泌乳期牛乳乳清差异表达糖蛋白的功能，找到了一些具有重要功能的糖蛋白，这为评价和改善牛乳品质、研发婴幼儿配方乳中糖蛋白质的改良及功能食品的生产提供理论依据。
