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实验室菌株保藏

放大字体  缩小字体 发布日期:2019-10-14
核心提示:其实我们实验室的保藏方法很简单,也是借鉴08-09年我的领导去中检所培训带回来的保藏方法,即使用液体培养基复苏菌液,然后加入等量的20%甘油,制成含10%甘油的菌悬液,然后分装至1ml/支,可以保存2年,但是黑曲霉我们是保藏孢子悬液,贮存于-15℃以下,有效期是1年。
   其实我们实验室的保藏方法很简单,也是借鉴08-09年我的领导去中检所培训带回来的保藏方法,即使用液体培养基复苏菌液,然后加入等量的20%甘油,制成含10%甘油的菌悬液,然后分装至1ml/支,可以保存2年,但是黑曲霉我们是保藏孢子悬液,贮存于-15℃以下,有效期是1年。
 
  现在也有很多实验室使用磁珠法保藏也是觉得效果不错,其保藏后贮存在2-8℃,效期1年。
 
  两个方法各有利弊,甘油冷冻法每次实验使用一支,不会重复使用,避免重复冻融对菌株的挑战以及重复开管引入的污染;但是磁珠法因为是好几颗磁珠放在一管保存液里,每次使用会从该管里夹取一粒复苏,可能重复操作引入污染,但是其优势在于对冰箱温度要求不高,一般实验室都有满足2-8℃的冰箱,而甘油冷冻管需要冷冻室进行保存,所以对没有—15℃以下温度保证的实验室来说,还需购买相应设备,这个就是各自实验室去评估选择了。
 
  这里我还是不太建议使用斜面,一两个月就要转一次,日常事情较多且对于菌株的确认其实在传代过程中也需要进行实验确认,这样又带来附加实验,一支买来的商业派生菌株(一般在省所买来的最少也是2代了,基本都会是3代这种)管不了太久又需要买了,本来很多微生物实验室人手就不够,转种的多还要多配培养基,没必要把精力放在这些事情上,如果实验室没有冷冻冰箱,那可以考虑磁珠法,有的话可以考虑甘油冷冻法,这样可以把工作菌株的使用有效期延长到1-2年。
 
  还有要提一下保藏培养基的问题,之前金葡、大肠、枯草、铜绿都是使用营养肉汤,生孢使用硫乙醇,白念使用马丁,黑曲霉使用TSA进行复苏,15版使用TSB、SDB、SDA了,我暂时不考虑更换细菌培养基,因为毕竟使用那么多年保藏效果比较理想,而且TSB有糖的问题,不过我还是觉得营养肉汤早晚会退出历史舞台,与其等到那时候束手无策,毕竟菌株保藏都是以年来计算的,到时候没得卖就完蛋了,还不如把事情做在前面,在保证菌株储备齐全的情况下,同步要挑战使用TSB保藏金葡、大肠、枯草、铜绿的实验(至少1年),生孢依旧硫乙醇,白念使用SDB,黑曲霉使用SDA。还有使用新的培养基复苏的菌浓问题,基本都比老的长的好,各个实验室可以先行试一下。
 
 
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