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阿魏菇乙酸乙酯相三萜类化合物对食管癌Eca109细胞的增殖抑制及机制

放大字体  缩小字体 发布日期:2020-02-07
核心提示:饮食与癌症化学预防已备受关注,如大蒜被广泛应用于食品和调味剂,而大蒜素可作为抗癌药物。有研究表明食物的生物活性物质与降低癌症风险有着密切的关系。
   饮食与癌症化学预防已备受关注,如大蒜被广泛应用于食品和调味剂,而大蒜素可作为抗癌药物。有研究表明食物的生物活性物质与降低癌症风险有着密切的关系。
 
  新疆大学生命科学与技术学院,新疆生物资源基因工程重点实验室的王 磊、张富春、刘 军*以前期优化后的阿魏菇粗三萜(Pleurotus ferulatus triterpenoid,PFTP)提取条件进行提取并分级萃取,研究阿魏菇乙酸乙酯相三萜类化合物(PFTP-E)对Eca109细胞的抗肿瘤作用机制,以期为食管癌的治疗提供植物源的天然抗肿瘤候选药物。
 
  1、PFTP对肿瘤细胞的增殖抑制作用
 
  PFTP对6 种细胞的生长均具有抑制作用。随着作用时间延长,PFTP对6 种细胞的增殖抑制能力均逐渐增强,表现出时间依赖性。PFTP对Eca109和CT26细胞抑制作用最强,在24 h对BGC823细胞无明显抑制作用。Eca109为人源肿瘤细胞,而CT26属于鼠源肿瘤细胞,因此本研究选用Eca109细胞系进行后续生物学分析。
 
  2、PFTP对Eca109细胞凋亡的影响
 
  1.6 mg/mL PFTP处理Eca109细胞24 h后,与空白对照和阴性对照组相比,阳性对照和PFTP组Eca109细胞凋亡率(PI和FITC双阳区及FITC单阳区)和坏死率(PI单阳区)存在极显着差异,说明PFTP可诱导Eca109细胞凋亡和坏死。原文图中显示PFTP诱导细胞凋亡的能力明显弱于顺铂,但引起细胞坏死的能力强于顺铂。这种差异很可能由于PFTP成分复杂,主成分不单一,造成细胞不同程度的损伤,引起细胞坏死程度较高,但诱导细胞凋亡活性成分含量低,诱导细胞凋亡能力弱于顺铂,因此对PFTP作进一步分离提纯。
 
  3、PFTP各萃取相对Eca109细胞增殖的影响
 
  PFTP-E、PFTP-P、PFTP-B在处理24、48、72 h对Eca109细胞的IC50分别为201.5、401.3、587.2?μg/mL,151.3、251.5、351.6?μg/mL和70.0、214.6、274.2?μg/mL,且处理时间越长IC50越小;相同处理时间下PFTP-E、PFTP-P、PFTP-B对Eca109细胞的IC50逐渐增大,表明PFTP各萃取相以时间和剂量依赖形式杀伤肿瘤细胞,PFTP-E对Eca109细胞的增殖抑制能力最强。
 
  4、PFTP-E对Eca109细胞凋亡的影响
 
  随着PFTP-E质量浓度的增加(100~300?μg/mL),细胞数量相比于空白对照组明显减少;空白对照组细胞为均匀蓝色细胞核,PFTP-E处理组细胞核因高度固缩呈高亮蓝白色(箭头),具有显着的浓度效应。综合上述结果可以说明PFTP-E通过诱导Eca109细胞凋亡而抑制其生长。
 
  5、PFTP-E对Eca109细胞线粒体膜电位的影响
 
  PFTP-E以浓度依赖性的方式增加FITC绿色荧光强度(细胞门内),相比于空白对照组,PFTP-E质量浓度大于200?μg/mL时可极显着增加JC-1单体荧光强度,降低线粒体膜电位,导致线粒体膜电位崩溃。说明PFTP-E可能通过线粒体途径诱导Eca109细胞凋亡。
 
  6、PFTP-E对Eca109细胞胞内ROS水平的影响
 
  PFTP-E处理组DCF相对荧光强度显着增加(表现为处理组峰发生偏移),表明PFTP-E以浓度依赖性显着诱导Eca109细胞胞内ROS产生。线粒体是ROS产生的主要细胞器,线粒体膜电位的降低致使线粒体膜通透性增加,导致ROS释放到细胞质,从而诱导细胞凋亡。因此推测PFTP-E可能引起癌细胞线粒体损伤,导致大量ROS释放到胞质造成细胞损伤,使细胞增殖受到抑制,从而引起细胞凋亡。
 
  讨 论
 
  PFTP-E能够上调促凋亡相关因子、下调抑凋亡相关因子的表达,表现出显着的促细胞凋亡作用,其促凋亡机制涉及MAPK/JNK信号通路,并与线粒体损伤途径、细胞周期阻滞、内质网应激及自噬有关。可以推测PFTP-E可通过诱导肿瘤细胞凋亡进而达到治疗癌症的作用,随着对阿魏菇三萜类物质不断的深入研究,开发阿魏菇三萜类组分作为新型抗癌药物具有广阔前景。
 
 
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