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重组黑芝免疫调节蛋白对小鼠巨噬细胞RAW264.7向M1型分化的影响

放大字体  缩小字体 发布日期:2020-02-07
核心提示:  目前,对黑灵芝中的多糖、灵芝酸等活性成分的研究较深入,但对其生物活性蛋白功能的研究很少。灵芝中的活性蛋白包括真菌免疫调节蛋白(FIP)、凝集素、糖蛋白和酶等。FIPs蛋白家族具有凝集血红细胞、刺激人外周血淋巴细胞和小鼠脾细胞增殖、促进细胞因子表达、增加细胞介素转导和抗肿瘤等活性。
   目前,对黑灵芝中的多糖、灵芝酸等活性成分的研究较深入,但对其生物活性蛋白功能的研究很少。灵芝中的活性蛋白包括真菌免疫调节蛋白(FIP)、凝集素、糖蛋白和酶等。FIPs蛋白家族具有凝集血红细胞、刺激人外周血淋巴细胞和小鼠脾细胞增殖、促进细胞因子表达、增加细胞介素转导和抗肿瘤等活性。
 
  上海交通大学农业与生物学院的刘 玲、李奇璋、周选围*、王玉亮*拟通过观察重组黑芝免疫调节蛋白(rFIP-gat)在体外对小鼠巨噬细胞RAW264.7经典活化M1型的影响,探索rFIP-gat抗肿瘤作用的机制。
 
  1、rFIP-gat对RAW264.7细胞毒性的分析
 
  
 
  rFIP-gat质量浓度在0~100μg/mL范围内对RAW264.7细胞没有毒性,且能显着促进其增殖;与空白对照组相比,rFIP-gat质量浓度为0.1μg/mL时差异极显着(P<0.01);质量浓度为1~100μg/mL时差异高度显着(P<0.001)。
 
  2、rFIP-gat对RAW264.7细胞吞噬能力的影响
 
  
 
  不同质量浓度rFIP-gat处理后RAW264.7细胞吞噬能力均有所提高。与空白对照组相比,rFIP-gat质量浓度超过2μg/mL时能够极显着提高RAW264.7细胞的吞噬能力(P<0.01,P<0.001)。
 
  3、rFIP-gat对RAW264.7细胞iNOS mRNA表达量及NO产生量的影响
 
  
 
  rFIP-gat质量浓度为0.5、5、50μg/mL时,RAW264.7细胞iNOS mRNA表达量与空白对照相比分别提高了0.76、5.05、136.45 倍,具有剂量依赖性。当rFIP-gat质量浓度超过5μg/mL时,其能够高度显着提高RAW264.7细胞iNOS mRNA表达量(P<0.001)。rFIP-gat各质量浓度处理组RAW264.7细胞iNOS mRNA表达量都远低于1μg/mL LPS处理组(其是空白对照组的1 360.64 倍)。
 
  4、rFIP-gat对RAW264.7细胞TNF-α mRNA表达量的影响
 
  
 
  rFIP-gat质量浓度为1~16μg/mL时,随着其质量浓度的提高,RAW264.7细胞TNF-α mRNA表达量不断增加,且与空白对照组相比具有显着性差异(P<0.05,P<0.001)。5μg/mL ConA组RAW264.7细胞TNF-α mRNA表达量是空白对照组的2.12 倍(P<0.001)。
 
  讨 论
 
  综上,推测rFIP-gat可以诱导RAW264.7细胞向M1型分化,表现为大量释放活性因子NO,上调TNF-α和iNOS mRNA的表达,增强RAW264.7细胞的吞噬作用,有利于巨噬细胞发挥抗肿瘤的作用。本实验结果为进一步研究FIP通过巨噬细胞途径发挥抗肿瘤作用提供依据。
 
 
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