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标准菌株的复活、传代及性能确认操作规程

放大字体  缩小字体 发布日期:2020-05-12
核心提示:购回的标准菌株一般为安培装冻干粉剂,依照随产品附有的菌种复活方法,以及《人间传染病微生物分类目录》和《实验室生物安全通用要求》,在相应的生物安全水平下,开启包装。用75%酒精棉球擦拭安培瓶上部,可用砂轮或锉刀在安培瓶上部划一小痕迹,用无菌纱布包住安培瓶,两手分别捏住安培瓶上下两端,稍向外用力便可打开安培瓶。
   1.标准菌株复活
 
  购回的标准菌株一般为安培装冻干粉剂,依照随产品附有的菌种复活方法,以及《人间传染病微生物分类目录》和《实验室生物安全通用要求》,在相应的生物安全水平下,开启包装。用75%酒精棉球擦拭安培瓶上部,可用砂轮或锉刀在安培瓶上部划一小痕迹,用无菌纱布包住安培瓶,两手分别捏住安培瓶上下两端,稍向外用力便可打开安培瓶。
 
  依据菌株特性选择合适的培养基和培养条件,用无菌吸管吸适量的液体培养基加到冻干块上,吹打混匀成悬液,将全部悬液移入含有5mL合适的液体培养基中,将管中残留的几滴悬液移种到斜面上,适宜的温度培养一定的时间。观察生长状况,可适当延长培养时间。
 
  2.菌株的性能确认
 
  2.1纯度检查
 
  菌落形态  取复活后的培养物,在相应的鉴别平板或非选择平板上划线分离,培养出单菌落,观察菌落形态是否符合该菌株要求,同一平板上的单菌落大小,形状、颜色、质地、光泽是否相似,对于出现两种以上形态的菌株,应再分别挑取单菌落划线,检测是否出现相同特征。
 
  2.2细胞形态
 
  取划线平板上的单菌落,革兰氏染色反应应符合要求,且呈现一致性。
 
  2.3生化鉴定
 
  必要时进行生化鉴定。
 
  2.4污染处理
 
  如发现菌株有污染,挑选目标菌培养成功后,将培养物灭菌销毁(121℃ 30min)。
 
  3.菌株的传代
 
  3.1标准储备菌株的制备
 
  标准储备菌株是在经多次传代后制备的多份相同的菌株。
 
  将复活后经过性能确认的菌株的斜面培养物,用0.85%的灭菌生理盐水0.5ml洗斜面菌苔成菌悬液。
 
  将上述菌悬液吸入灭菌管中,加入0.5mL 40%的灭菌甘油,混匀,密封。保藏温度为-18℃。
 
  3.2工作菌株的制备
 
  由冻干或超低温保存的标准储备菌株经一次传代得到的菌株。工作菌株不宜再传代,工作菌株使用和储存过程中严格遵守无菌操作,即不存在交叉污染,可以多次使用。保藏温度为4-6℃。
 
  3.3菌株的保藏
 
  制备好的菌株应由室主任统一编号,标识,专人专柜保藏。
 
 
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