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鸡肉中金刚烷胺间接竞争ELISA检测方法的建立

放大字体  缩小字体 发布日期:2020-06-30
核心提示:随着中国畜禽产品市场的蓬勃发展,金刚烷胺曾在水产、畜牧养殖、饲料添加及动物疾病防治等方面得到广泛应用,但是近年来由于副作用大,对消费者存在较大安全风险。
   随着中国畜禽产品市场的蓬勃发展,金刚烷胺曾在水产、畜牧养殖、饲料添加及动物疾病防治等方面得到广泛应用,但是近年来由于副作用大,对消费者存在较大安全风险。目前关于金刚烷胺残留的主要检测方法均为仪器法,其样品前处理复杂、检测成本高。鉴于我国国情,仪器法并不适用于现场快速检测和高通量筛查。华南农业大学食品学院、广东省食品安全重点实验室的谭庶、杨金易和孙远明*等人旨在通过建立与现有快速检测方法相比更为灵敏、快速和可靠的可检测金刚烷胺免疫检测分析法,从而为金刚烷胺残留的商品化快速检测产品的开发提供技术支持。
 
  金刚烷胺的ELISA方法已有多篇发表,该文建立方法与前述文章相比所合成的半抗原较有优势,本研究通过分析现有的金刚烷胺半抗原及其抗体,设计并制备一种针对金刚烷胺分子特点的新型半抗原,其利用N-(1-金刚烷胺基)肼甲酰胺与乙醛酸合成新式金刚烷胺半抗原,采用活泼酯法将金刚烷胺半抗原分别与血蓝蛋白、牛血清白蛋白偶联合成免疫原和包被原,将所制备的人工抗原免疫BALB/c小鼠,并制备了特异性识别金刚烷胺的单克隆抗体。ic-ELISA方法经系统优化后,再对ic-ELISA方法进行精密度与准确性评价,并与仪器方法进行对比。
 
  结论显示:成功建立了快速检测金刚烷胺残留的ic-ELISA。方法对金刚烷胺IC50为0.69 μg/L,线性检测范围为0.07-6.15 μg/L,检出限为0.21 μg/L,与金刚烷胺其余结构及功能类似物均无交叉反应,方法特异性较好;添加回收率均101.69%-108.71%,变异系数<15%;与HPLC-MS/MS方法检测结果相关性良好,方法适用于实际样品检测。
 
  通讯作者简介
 
  孙远明
 
  华南农业大学二级教授、博士生导师。现任教育部食品科学与工程类专业教学指导委员会副主任委员、畜禽产品精准加工与安全控制技术国家地方联合工程研究中心主任、广东省食品质量安全重点实验室主任、农业部农产品贮藏保鲜质量安全风险评估实验室(广州)主任、广东省食品学会副理事长、广东省食品安全学会副会长、广东省营养学会副理事长,曾任华南农业大学食品学院院长。长期从事食品安全与营养领域的教学与科研工作,成绩显着。教学上,主持“食品质量与安全国家级特色专业建设”项目、主持《食品营养学》国家级精品课程、主编《食品营养学》国家级规划教材等,牵头组织制订《食品质量与安全本科专业规范》和《食品质量与安全专业教学质量国家标准》,2014年获得国家教学成果二等奖(第一)。科研上,先后主持国家973、863、自然科学基金及省部级科研项目30多项,发表论文近300篇,SCI收录70多篇,取得授权专利40多项,获得国家科技进步二等奖1项(第一),中国商业联合会科学技术奖特等奖及省部级科技奖励12项,指导全国百篇优秀博士论文提名奖1篇。此外,还先后获得国务院政府特殊津贴、全国优秀科技工作者、广东省劳动模范、广东省教学名师、广东省优秀博士后等荣誉称号。
 
  第一作者简介
 
  谭 庶
 
  华南农业大学食品科学与工程硕士。现任温氏食品集团股份有限公司温氏研究院试剂研究室研发专员,从事兽药残留、动物疫病等快速检测试剂产品研发,目前已开发出氟苯尼考、氯霉素、金刚烷胺等ELISA和GIGA产品,广泛应用于一线检测平台,部门年销售额达到1000万,先后参与国家863、自然科学基金及市级科研项目3项,发表论文EI一篇,取得授权专利1项。
 
 
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