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脉冲电泳仪影响DNA分离的因素有哪些

放大字体  缩小字体 发布日期:2021-01-20
核心提示:是近年发展起来的分离效果较好的DNA分离方法,可以有效分离50kb甚至10Mb的DNA大片段。因此脉冲电泳仪已经成为DNA分离的主要仪器。脉冲电泳仪的使用条件......
  脉冲场凝胶电泳是近年发展起来的分离效果较好的DNA分离方法,可以有效分离50kb甚至10Mb的DNA大片段。因此脉冲电泳仪已经成为DNA分离的主要仪器。脉冲电泳仪的使用条件对DNA分离速度与效果有很大影响,主要包括以下几点:
 
  1.电泳缓冲液
 
  在脉冲电泳时常使用的电泳缓冲液有三种,不同缓冲液的离子强度不同,电泳速度也不同。
 
  2.琼脂糖种类及浓度
 
  琼脂糖种类对脉冲场电泳虽然影响不是甚大,但也有一定程度影响。低电渗(EEO)的琼脂糖使电泳速度加快。有条件的情况下,使用超纯琼脂糖可产生较好的分离效果。凝胶的浓度太低,使泳动速度加快,不利于较小或中等长度DNA片段的分离。胶的浓度太大,则影响大分子DNA的分离。因此要根据具体情况,选用不同浓度的胶。在一-般情况下,常采用的凝胶浓度为1~1.4%。
 
  3.电压
 
  6~10伏特/cm的电压梯度常可使几十kb到1000kb的DNA片段得到有效分离。如果想分离更长的DNA片段,则应适当降低电压梯度。
 
  4.变换电场方向的时间间隔
 
  开关(即变换电场方向)的时间间隔对电泳效果影响较大。DNA在泳动过程中再定向所需的时间和DNA的大小呈正相关,因此较大的DNA分子需要较长的开关时间间隔。在确定了开关时间间隔的情况下,小于一定尺寸的DNA分子能够随着电场方向的变化再定向并在新电场影响下泳动,而大于一定尺寸的DNA分子在再定向尚未完成时便发生了开关的再次变化,因此不能泳动和得到有效分离。
 
  5.温度
 
  电泳时通过循环装置使缓冲液保持恒定是重要的。温度的高低对电泳速度也有重要影响。
 
 
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