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在分子生物学中紫外分光光度计有哪些应用?

放大字体  缩小字体 发布日期:2021-03-06
核心提示:分子生物学是在分子水平研究蛋白质、核酸等生物大分子结构与功能的学科,是生物学的前沿领域。分子生物学的研究需要对生物大分子进行检测,常用的仪器包括PCR仪、核酸......
  分子生物学是在分子水平研究蛋白质、核酸等生物大分子结构与功能的学科,是生物学的前沿领域。分子生物学的研究需要对生物大分子进行检测,常用的仪器包括PCR仪、核酸提取仪等。除了专门的分子生物学仪器,通用的化学分析仪器也在分子生物学中有广泛的应用,比如紫外分光光度计。
 
  紫外分光光度计在分子生物学中主要有以下几点应用:
 
  1.蛋白质含量测定
 
  (1)直接定量法:
 
  利用紫外分光光度计直接定量检测蛋白质含量是利用蛋白质含有的酪氨酸和色氨酸在紫外光区280 nm处具有最大吸收的特征,根据该波长的吸光度与蛋白质浓度成正比的关系测定其含量。
 
  直接定量法适合测试较纯净、成分相对单一的蛋白质。特点在于快速简便,缺点包括易受到平行物质如DNA的干扰、敏感度差、要求蛋白的浓度较高等。
 
  (2)比色法:蛋白质的组成成分氨基酸与外加的显色基团或染料反应,产生有色物质。有色物的浓度与氨基酸的数量相关,从而反映蛋白质浓度。常见方法包括BCA、Bradford、Lowry等几种。
 
  2.核酸浓度测定和纯度判定
 
  核酸的最大吸收波长是260 nm,蛋白质的最大吸收波长是280 nm。在波长260 nm的紫外线下,1 OD值光密度相当于约50 μg/mL双链DNA,约40 μg/mL单链DNA或RNA。通过OD260与OD280的比值还可初步判断核酸的纯度,纯DNA和RNA样品的0D260/280分别为1.8和2.0,若样品中有蛋白质或酚的污染,比值将低于此值。
 
  紫外分光光度计一般只能测定质量浓度大于0.25 μg/mL的核酸浓度。
 
  3.细菌密度测定
 
  通常情况下,根据经验和目测推断细菌的生长密度和生长期,而OD600是用来检测细菌浓度的重要指标,是追踪液体培养物中微生物生长的标准方法。实验中以未加菌液的培养液作为空白液,再定量培养后的含菌培养液。注意受试的样品不能离心,要保持细菌悬浮状。
 
  紫外分光光度法是基础的光谱分析方法,根据被测量物质分子对紫外-可见波段范围单色辐射的吸收或反射强度来进行物质的定量、定性或结构分析。紫外分光光度法的应用很广泛,可用于化学、材料、生物、医学、食品、环境等领域。分子生物学中的应用是指其中的一小部分。
 
 
 
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