果蔬等生鲜农产品作为高风险的食品，通常不经烹饪直接生食，且在供应链中的不同环节都容易被污染，如人类粪便污染的灌溉用水、肥料、食物处理用水、食物处理者的不卫生操作、交叉污染等，因而也成为HAstV的常见传染源。
来自北京出入境检验检疫局检验检疫技术中心的马丹、魏海燕、徐蕾蕊等人，将国际标准ISO/TS 15216-2:2013中提取果蔬表面诺如病毒和甲肝病毒RNA的技术应用到HAstV中，并结合已报道的实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应（reverse transcription-polymerase chainreaction，RT-PCR）引物和探针及通过体外转录构建的HAstVcRNA标准分子，建立起果蔬中HAstV的高灵敏快速定量检测方法。利用人工感染的大白菜和草莓样品，分析了不同果蔬中病毒回收率及检测重复性，最终通过60 份实际样品的检测对该方法的实用性加以进一步验证。
讨 论
HAstV的衣壳蛋白编码基因（ORF2）5ˊ端是一个核酸序列高度保守区，多用于引物和探针的设计。本实验将该系列引物和探针引入果蔬中HAstV的检测，通过对10 倍梯度稀释的cRNA进行进行实时荧光定量RT-PCR扩增分析，发现该系列引物和探针的扩增效率达95%以上，最低检测限可达5.6 拷贝/反应，且检测Ct值同模板拷贝数的对数值存在良好的线性关系，R2达0.997，从而为实际样品的定量检测奠定了基础。
虽然病毒是严格的细胞内寄生物，但在果蔬中不能繁殖，果蔬作为病毒的携带者，病毒载量往往较低，再加上其基质成分的复杂性，使得病毒的有效富集和病毒RNA的高纯度、完整提取成为决定食源性病毒检测成败的关键，也是近年来研究的热点。
我国已有的针对HAstV的检测标准SN/T2519—2010《贝类中星状病毒检测方法普通PCR和实时荧光PCR方法》、SN/T2518—2010《贝类食品中食源性病毒检测方法纳米磁珠-基因芯片法》和SN/T 3841—2014《出口贝类中诺如病毒和星状病毒的快速检测反转录-环介导恒温核酸扩增（RT-LAMP）法》均是针对贝类食品，由于贝类和果蔬基质间的显着差异，其病毒RNA的提取方法并不适用于果蔬类食品。ISO在2013年发布的“食品和动物饲料微生物学——食品中甲肝病毒和诺如病毒的实时荧光定量RT-PCR检测水平方法（ISO/TS15216-2:2013）”中给出了针对不同果蔬表面的病毒富集、洗脱与RNA的提取方法，但却未涉及HAstV。
鉴于HAstV同诺如和甲肝病毒存在相似的结构特点，即均为球形、无包膜病毒颗粒，内含单股正链RNA，并在基因结构3′端含有polyA尾，因此，本研究将ISO/TS 15216-2:2013中诺如病毒和甲肝病毒的RNA提取技术应用到HAstV中，通过对人工感染的大白菜和草莓样品检测发现HAstV的回收率最高分别可达9.63%和1.03%，满足国际标准ISO/TS 15216-2:2013检测要求。同时，研究结果表明HAstV自食品硬表面（如大白菜）中的回收率普遍高于软表面（如草莓），这可能是由于软表面对病毒的吸附性更强，病毒不易洗脱，操作步骤更加繁杂，增加病毒损失的机率，且草莓中果胶等核酸扩增抑制成分的释放，均会导致病毒回收率的降低。此外，研究还发现果蔬中病毒回收率会随着污染水平的降低而急剧下降，特别是在大白菜样品中这一趋势更加明显，其添加粪便的稀释度由10－2降为10－3时，病毒回收率下降了10倍，表明低污染水平的样品检测难度更大，需要开发更为高效灵敏的病毒富集提取技术，以期进一步提高病毒的检出率。
实验最终通过15 份人工感染和60 份实际果蔬样品的检测，证明该方法具有良好的重复性和稳定性，病毒检出率达1.67%，其检测时间约3～5 h，无需昂贵的试剂和特大型仪器设备，并可实现定量检测，可作为食品安全检测实验室的常规方法，在食源性病毒筛查与风险评估中具有重要的应用价值。
