我国是鳗鱼养殖与加工出口大国。为了维护企业与消费者利益以及正常市场秩序，应企业与执法部门要求，建立鳗鱼种类的精准鉴定方法，对我国鳗鱼养殖业与加工出口外贸易具有重要的现实意义。为了维护企业与消费者利益以及正常市场秩序，应企业与执法部门要求，建立鳗鱼种类的精准鉴定方法，对我国鳗鱼养殖业与加工出口外贸易具有重要的现实意义。聚合酶链式反应（PCR）扩增技术在食品中鱼类物种成分的鉴别已有较多研究与应用，在鳗鱼中的应用主要是基于PCR的随机扩增多态性DNA遗传多样性分析与物种鉴别探讨的研究，但在检验检疫中实践应用，缺乏稳定性与准确性。目前国内外鲜见利用多基因DNA条形码进行鳗鱼物种鉴定的研究报道。
来自福建出入境检验检疫局检验检疫技术中心的陈文炳、邵碧英和缪婷玉等人在基于16S rRNA基因部分DNA片段建立的DNA条形码（243 bp）鉴定美洲鳗、欧洲鳗、日本鳗3 种鳗鱼的基础上，延长16S rRNA基因部分DNA片段为262 bp并筛选除了Cyt b基因与COⅠ基因等多基因的标准DNA条形码，建立了美洲鳗、欧洲鳗、日本鳗、莫桑比克鳗、花鳗、太平洋双色鳗6 种鳗鱼的多基因DNA条形码物种精准鉴定方法。为维护企业与消费者利益以及正常市场秩序，避免贸易壁垒，提供技术保障，对我国鳗鱼养殖业与加工出口对外贸易具有重要的现实意义。
16S rRNA、Cyt b、COⅠ 基因片段PCR引物筛选及其产物序列分析
采用3 对通用引物对6 种鳗鱼的3 个基因（16S rRNA、Cyt b、COⅠ）部分DNA进行PCR扩增，PCR产物双向测序，6 种鳗鱼各获得3 条16S rDNA、Cyt b、COⅠ基因部分DNA序列，片段长度分别为638～643、464～466、705～707 bp，在GenBank数据库中BLAST比对，分别与数据库中的美洲鳗、欧洲鳗、日本鳗、莫桑比克鳗、花鳗、太平洋双色鳗的相应基因序列的同源率均为99%。基于各基因的6 条序列的同源性比对，排除序列中存在碱基缺失部分与不具差异的区间，选取各物种序列同源的片段用于设计新引物。
DNA条形码标准序列的筛选与在GenBank数据库中比对（BLAST）分析
应用自主设计的3 对引物16S rDNA 504、Cyt b 400、COⅠ609对6 种鳗鱼进行PCR扩增与测序，从各序列中筛选、截取6 种鳗鱼间碱基序列同源性低、物种特异性强、不存在碱基缺失或插入的片段，作为6 种鳗鱼的16S rRNA、Cyt b 、COⅠ3 个基因标准DNA条形码，片段长度分别为262、280、300 bp，各物种序列相同的首尾下划线部分8 个碱基为截取目的片段的引子。
除太平洋双色鳗外，日本鳗、美洲鳗、欧洲鳗、莫桑比克鳗、花鳗的DNA序列匹配（同源）率除了个别情况，均为99%～100%。在16S rDNA条形码碱基序列比对中，欧洲鳗样品的DNA条形码在GenBank数据库中比对与一个A. rostrata（KJ564271.1）片段同源率为100%，可能是序列提供者提交时弄错种名。样品莫桑比克鳗的Cyt b（280 bp）DNA条形码比对中，出现与一个印度洋双色鳗（A. bicolor bicolor）（AB021780.1）片段同源率是100%，也可能是序列提供者提交了错误的种名。另外，在供试样品太平洋双色鳗的3 个基因DNA条形码与GenBank数据库比对中发现，供试样品与印度洋双色鳗物种亲缘关系非常接近，16S rDNA条形码碱基序列比对中，同源率为100%的，排序前面100 条片段中，前6 个片段是太平洋双色鳗，接在后面的是82 条印度洋双色鳗，同源率为99%的12 条也都是印度洋双色鳗；在Cyt b（280 bp）DNA条形码比对中，同源率为100%的16 个片段都是太平洋双色鳗，同源率99%的57 条中，太平洋双色鳗占23 条，印度洋双色鳗占34 条，余下同源率98%的27 条也均为印度洋双色鳗；在样品太平洋双色鳗的COⅠ（300 bp）DNA条形码序列与GenBank数据库比对中发现，同源率为100%的只有1 条片段（A. bicolorpacifica，AP007237.3），其他99 条均是同源率为98%的印度洋双色鳗。
DNA条形码鉴定方法的建立与应用
各样品3 个基因的DNA序列与相应DNA标准条形码的同源率均为100%。其中，8 个样品判定为美洲鳗、5 个样品为欧洲鳗，3 个样品为日本鳗，4 个样品为莫桑比克鳗，5 个样品为花鳗，5 个样品为太平洋双色鳗。
结 论
各样品基于3 个基因DNA条形码的比对，符合同源率指标，物种判别结果互相吻合，从而精准判别样品的所属物种。该方法稳定、精准、易于操作，可应用于6 种鳗鱼的物种鉴定，值得推广。
