对于水蜜桃采后病害的防治，目前仍以化学杀菌剂为主，但防效不甚理想，而且长期使用化学杀菌剂不但会导致病菌产生抗药性，同时在食品安全及生态环境方面也会导致一系列严重的负面后果。为克服这些问题，急需一种对环境友好且性价比高的方法，而生物防治则可以满足这些需求。
上海大学生命科学学院的李培中等人前期研究从豆腐乳中分离得到了1 株对水蜜桃采后病害具有较好防治效果的生防菌株，将其编号为CF-2。上海大学生命科学学院的李培中、高海燕*，上海应用技术大学的许 丽等人旨在通过形态学、生理生化、分子生物学等方法对生防菌株CF-2进行鉴定，并探究其生物学特性及对水蜜桃采后病原真菌的抑制作用，以期为进一步研究利用生物防治方法提供参考，为解决水蜜桃采后腐烂变质的病害控制提供理论依据。
1、菌株CF-2的鉴定
生理生化特性
CF-2具有运动性，在氯化钠质量分数为2%～7%的情况下可以生长，能水解淀粉，能液化明胶，无法在厌氧条件下生长，能利用葡萄糖产酸但不能产气，能利用柠檬酸盐，V-P实验呈阳性反应，接触酶呈阳性反应，与枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）特征一致。
16S rDNA同源性鉴定
利用引物P0和P6，扩增出CF-2的16S rDNA片段，其长度为1 516 bp，比预期1 513 bp多3 bp，分析得知多出的3 bp均发生在重复序列处，由测序误差产生。通过BLAST分析，扩增的片段序列与枯草芽孢杆菌的16S rDNA部分序列的同源性达99%以上。
2、菌株CF-2生物学特性
CF-2生长曲线
CF-2在LB液体培养基中，当培养时间为48 h时，培养液的吸光度最大。CF-2在接种到LB培养液后的24 h内处于对数生长期，24～48 h内处于稳定生长期，接种51 h后进入衰老期。
pH值对CF-2生长的影响
该菌在较大pH值范围内都能生长，但pH值对CF-2菌株生长影响明显。其中pH 5.0～9.0适宜CF-2的生长，而CF-2最适pH值在7.0左右，可见该菌适宜在中性条件下生长。
温度对CF-2生长的影响
温度对生防菌CF-2生长和繁殖有明显的影响，在20～50 ℃范围内，CF-2生长和繁殖速率呈先上升后下降趋势，最适温度为37 ℃左右。
3、菌株CF-2对病原真菌的抑制作用
CF-2对病原真菌的体外抑制效果
CF-2对供试病原菌表现出较强的抑制作用，平均抑制率为（38.70±9.22）%。其中对复端孢霉的抑制作用最大，抑制率为（52.30±3.67）%，其次是对丝核菌、交链孢霉与桃褐腐菌，抑制率分别为（37.63±3.28）%、（35.93±2.71）%与（28.94±1.65）%。
CF-2不同组分液的体外抑菌效果及其无菌滤液的抗菌活性
01
CF-2不同组分液对菌丝生长
的影响
菌株CF-2 24 h发酵液、菌悬液及无菌滤液对4 种病原菌均具有一定的抑制作用，其中无菌滤液对桃褐腐菌、丝核菌、复端孢霉与交链孢霉的抑菌圈直径分别为（10.08±0.82）、（13.53±1.43）、（26.19±1.42）mm及（12.82±0.61）mm，抑菌作用较好，说明CF-2的代谢产物中含有抑菌物质。
02
CF-2无菌滤液对菌丝生长的影响
在病原真菌接种7 d后，交链孢霉、丝核菌、桃褐腐菌和复端孢霉的空白对照组菌落直径已经分别长满整个平板（9 cm），而添加无菌滤液的培养基中交链孢霉、丝核菌、桃褐腐菌和复端孢霉菌落直径分别为（1.9±0.1）、（3.0±0.1）、（3.0±0.1）cm和（3.1±0.1）cm，可见添加无菌滤液的抗性培养基菌落直径明显小于空白对照组；CF-2无菌滤液对桃褐腐菌、丝核菌、复端孢霉、交链孢霉的抑制率分别为（67.22±2.68）%、（65.23±3.47）%、（65.19±2.63）%、（77.41±1.91）%，平均抑制率达到（68.76±5.77）%，说明CF-2经发酵产生的代谢产物能显着抑制致病真菌的生长，尤其是对交链孢霉的抑制效果最为明显。
03
CF-2无菌滤液对病原菌
孢子萌发率的影响
CF-2的无菌滤液可以使病原真菌的菌丝生长受到抑制，使病原菌孢子在适宜条件下不能正常萌发，说明CF-2的代谢产物对病原菌的生长和代谢产生了抑制作用；同时CF-2无菌滤液对4 种不同病原菌的抑制效果不同，对交链孢霉的抑制效果最好。
4、CF-2组分液对水蜜桃采后的保鲜效果
在第3天时，空白对照组已出现腐烂的果实，其他经过CF-2组分液喷洒处理与空白对照有显着性差异（P＜0.05）；在第4天时，CF-2 24 h发酵液处理的果实开始出现腐烂，而CF-2无菌滤液与CF-2菌悬液处理的果实未腐烂，保鲜效果与发酵液差异显着（P＜0.05）；到第6天时，CF-2 24 h发酵液、无菌滤液与菌悬液处理组的好果率显着高于空白对照组，其中无菌滤液处理组的好果率最高，显着高于其他处理组（P＜0.05），说明在室温下，CF-2 24 h发酵液及无菌滤液与菌悬液对水蜜桃均有显着的保鲜效果，其中无菌滤液的效果最好，第6天时无菌滤液处理组好果率为（95.5±1.9）%，较空白对照组（66.5±1.7）%提高29%。
结 论
对1 株分离自豆腐乳的生防菌株CF-2进行形态学特征、生理生化特征鉴定，同时通过16S rDNA基因序列分析法进行分子鉴定，确定该菌为枯草芽孢杆菌，该菌24～48 h繁殖速度最旺盛，最适生长pH 7.0，最适生长温度为37 ℃。
CF-2对4 种病原真菌在体外均有抑制作用，平均抑制率为（38.70±9.22）%，其中对复端孢霉的抑制作用最大，抑制率为（52.30±3.67）%。CF-2 24 h发酵液及无菌滤液与菌悬液对4 种病原菌均有较强的抑制效果，其中无菌滤液对4 种病原真菌的平均抑制率为（68.76±5.77）%，无菌滤液对交链孢霉的抑制作用最大，抑制率为（77.41±1.91）%；经过CF-2无菌滤液处理后，真菌孢子萌发时间较空白对照组均延长62～64 h，12 d后孢子萌发率较空白对照组平均降低87.93%；在实体实验中，25 ℃室温CF-2 24 h发酵液及无菌滤液与菌悬液对水蜜桃的保鲜效果非常明显，可有效提升好果率，其中无菌滤液效果最好，第6天时较空白对照组好果率提升了29%，表明CF-2及其代谢产物对4 种水蜜桃采后病原菌有较强的抑制作用，同时对水蜜桃采后抑制腐烂效果明显。
