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具有肠道动力及肠道菌群调节功能乳杆菌的筛选及功能评价

放大字体  缩小字体 发布日期:2019-10-16
核心提示:功能性便秘是一种临床上常见的胃肠道疾病。有研究表明,便秘患者普遍存在焦虑、抑郁情绪,间接影响其在社会关系等领域的生活质量。此外,长期便秘将会导致肠壁损伤,肠道中毒素聚集堆积,从而引起一系列全身性并发症。
   功能性便秘是一种临床上常见的胃肠道疾病。有研究表明,便秘患者普遍存在焦虑、抑郁情绪,间接影响其在社会关系等领域的生活质量。此外,长期便秘将会导致肠壁损伤,肠道中毒素聚集堆积,从而引起一系列全身性并发症。
 
  益生菌是指给予(摄入)充足的数量能对宿主产生一种或多种特殊且经临床论证的功能性健康益处的活的微生物,主要包括乳杆菌、双歧杆菌等。目前常见的微生态制剂如培菲康、丽珠肠乐、整肠生、金双歧等,主要以混菌制剂较多,且以双歧杆菌和芽孢杆菌多见。综合乳杆菌潜在的益生功能,来自江南大学食品学院的沈旭丹、吉梦馨、翟齐啸和田丰伟*等人通过体外相关评价指标,综合考察了45 株来自泡菜或人类肠道的乳杆菌的生理特性,并对部分乳杆菌进行了抗生素耐药性评价,综合筛选出了3 株安全并具有优良特性的乳杆菌进行调节肠道功能的体内评价,以期获得具有调节肠道动力以及肠道菌群功能的乳杆菌,丰富益生菌资源库,并为其后续在肠道功能紊乱及相关疾病上的应用提供理论依据。
 
  1、乳杆菌的体外特性分析
 
  乳杆菌在模拟胃肠道中的耐受能力
 
  本实验参考了常用的模拟胃肠道方法,探究初始浓度均为2×108 CFU/mL的不同乳杆菌在先耐受pH值为3.0的胃液3 h,继续耐受含3 g/L胆盐的肠液4 h后的存活情况。结果发现,不同乳杆菌的耐酸、耐胆盐能力存在显着差异,其中瑞士乳杆菌LB25最高,达到了34.18%,而最低的格氏乳杆菌LG1的存活率仅有0.15%。同时本实验以标准菌株鼠李糖乳杆菌LGG作为耐酸、耐胆盐实验的标准参考,其耐酸、耐胆盐后的平均存活率为6.35%,在连续经受胃液和肠液后,受试乳杆菌的存活率均显着降低,仅有11 株乳杆菌的最终存活率在10%以上,其中LC9、LP17、LB25、LF38的存活率在20%以上,表现出了良好的耐酸、耐胆盐能力。
 
  乳杆菌利用低聚糖特性的研究
 
  干酪乳杆菌、植物乳杆菌、发酵乳杆菌以及鼠李糖乳杆菌普遍都能利用这3 种低聚糖,但个体之间存在一定的差异。乳杆菌代谢低聚糖时需要借助于转运蛋白以及胞内糖苷酶的参与。
 
  乳杆菌产SCFAs能力的研究
 
  乙酸的产量占SCFAs总产量的绝大部分,其中所有的受试乳杆菌均可以产4 种SCFAs,但产酸能力具有差异性,格氏乳杆菌LG1((3.20±0.50)mmol/L)、植物乳杆菌LP21((3.60±0.38)mmol/ L ) 、发酵乳杆菌LF37((3.64±0.24)mmol/L)和鼠李糖乳杆菌LR45((2.90±0.05)mmol/L)具有良好的产SCFAs能力。
 
  乳杆菌的安全性评价
 
  除发酵乳杆菌LF34外,其余14 株乳杆菌的抗生素安全性均符合要求,氯霉素MIC为1.30×10-7~20.00×10-7 g/mL,红霉素MIC为1.00×10-9~250.00×10-9 g/mL,克林达霉素MIC为2.00×10-8~25.00×10-8 g/mL,新霉素、链霉素和庆大霉素的MIC分别为2.50×10-7~80.00×10-7、5.00×10-7~80.00×10-7、2.50×10-7~20.00×10-7 g/mL。
 
  2、乳杆菌对小鼠肠道功能的调节作用
 
  所选菌株对小鼠健康指标的影响
 
  各实验组小鼠的体质量在实验过程中略有上升,而除干酪乳杆菌LC9-L干预组的食物利用率低于空白组外,其余干预组的食物利用率均高于空白组,且组间并没有显着性差异,说明所选3 株乳杆菌灌胃15 d后对小鼠的健康无负作用。
 
  所选菌株对小鼠肠道运动的影响
 
  干酪乳杆菌LC9和发酵乳杆菌LF37这2 株菌的3 个剂量组小肠推进率均显着高于模型组,以及首粒排黑便时间均显着低于模型组,说明这2 株菌可以促进肠道蠕动,加速排便。而鼠李糖乳杆菌LR45改善肠道运动能力上具有浓度依赖效应。
 
  所选菌株对小鼠粪便水分质量分数以及SCFAs含量的影响
 
  各组小鼠的粪便形态和粪便水分质量分数均在正常范围内,干预组干酪乳杆菌LC9-H、LC9-M组小鼠的粪便水分质量分数显着高于空白组。
 
  灌胃后各乳杆菌处理组小鼠的SCFAs含量均呈现上升趋势,其中,干酪乳杆菌LC9-M组乙酸、丙酸、异丁酸、正丁酸的含量均显着增加,发酵乳杆菌LF37-M干预组乙酸与正丁酸的含量显着上升,鼠李糖乳杆菌LR45-M组丙酸的含量显着上升。体外实验表明受试乳杆菌具有一定的产SCFAs能力,从而解释了其摄入后小鼠粪便内SCFAs含量的提高。但SCFAs增加量显着高于其体外产酸能力,可能是受试乳杆菌在小鼠肠道内产生一定量的SCFAs,降低了肠道pH值,从而促进了产SCFAs菌株的生长,进一步提高了肠道中SCFAs的含量。
 
  所选菌株对小鼠粪便菌群的影响
 
  小鼠粪便菌群中共检测出7 个门,主要由Firmicutes((26.7±4.5)%)和Bacteroidetes((61.6±0.3)%)组成,除干酪乳杆菌LC9-H外的所有干预组小鼠粪便中Verrucomicrobia的相对丰度与空白组相比均明显增加,其中干酪乳杆菌LC9-H、发酵乳杆菌LF37-H、鼠李糖乳杆菌LR45-L干预组小鼠粪便中Firmicutes的相对丰度明显降低,干酪乳杆菌LC9-M、LC9-L干预组小鼠粪便中Proteobacteria的相对丰度明显增加。
 
  结 论
 
  干酪乳杆菌LC9、发酵乳杆菌LF37和鼠李糖乳杆菌LR45的耐酸耐胆盐存活率高于10%,均能利用低聚果糖、低聚木糖、低聚半乳糖,且短链脂肪酸产量高于1.2 mmol/L。此外,3 株乳杆菌均能促进小鼠的小肠推进率,缩短首粒排黑便时间,增加粪便水分质量分数,加快肠道运动,同时能提高小鼠粪便菌群中有益菌的相对丰度,改善菌群结构。综上,这3 株菌对小鼠肠道功能有一定的调节作用,具有潜在的应用价值。
 
 
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