沙门氏菌生化鉴定盒

一）整套试剂及用品鉴定生化反应的10种试剂（表1）、10瓶0.85%无菌生理盐水、1瓶0.5 McFarland的浊度管、10支一次性吸管。二）生化管的使用方法开启西林瓶前，用75%酒精棉消毒西林瓶表面，在无菌条件下，按铝盖上的箭头方向打开铝盖，撕开铝盖，打开西林瓶胶塞（如左图）。所有的西林瓶在使用后均高压灭菌后方可弃去。注意：氰化钾生化管，应尽量将胶塞套紧，以免氰化钾挥发造成假阳性！（如果发现氰化钾生化鉴定管的颜色由浅黄色变为深褐色或黑色即为变质，不能继续使用）三）沙门氏菌生化鉴定盒的详细使用方法沙门氏菌为需氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌，有动力，有周鞭毛（但有无动力的变种），最适温度为37℃，最适pH为7.2～7.6，在固体培养基上37℃ 24h菌落可呈中等大小，光滑，圆形，湿润，隆起，在液体培养基内生长均匀浑浊。挑取平板分离的可疑菌落直接进行三糖铁琼脂和营养琼脂培养，将可疑菌落置于已配备的无菌生理盐水，与0.5 McFarland的浊度管比浊，将菌悬液制备成0.5McFarland ( 约10⁸cfu/mL )，用吸管吸取2滴（约0.06mL）菌悬液加入每种微量生化管内。将已接种的西林瓶再套上胶塞，一般采用全加塞（如右图左两瓶所示），特殊情况在下表注明采用半加塞（如右图右两瓶所示），直立于内托的凹槽内（如右图），或放置于合适的瓶架中，于35－37℃培养箱中培养，结果观察见表1。注意：如有特殊的接种方式、培养时间或培养方式，请详见每种生化鉴定管附带的使用说明。

表1

产品名称	结果判定		培养时间 （小时）	使用说明
	阳性	阴性
三糖铁琼脂	产酸变黄色 产硫化氢变黑色	不变色	24	用接种针挑取新鲜菌苔穿刺，穿刺完毕后在斜面上划“之”字形接种，西林瓶半加塞（如图2右两瓶所示）后竖立培育。
蛋白胨水	红色	不变色	24	西林瓶半加塞（如图2右两瓶所示）培养后加靛基质试剂2－3滴，立即观察结果。
尿素	桃红色	淡橙红色	12－24
氰化钾	生长	不生长	24－48	试验管与对照管均生长为阳性；试验管不生长，对照管生长为阴性。
赖氨酸脱羧酶	试验管蓝绿色， 对照管变黄	试验管与对照管均变黄	18－24	每株被检菌应同时接种氨基酸对照管一支，并加灭菌液体石蜡3－4滴覆盖培养基表面。培养18－24小时，未见阳性结果，继续培养4天，再做最终结果判定。
甘露醇、山梨醇	黄色	紫色	8－24
β－半乳糖苷（ONPG）	深黄色	淡黄色或无色	12－24

注:本鉴定盒是按照环凯产品目录中的品种成份从左到右的顺序摆放。
四）沙门氏菌生化鉴定特征自选择性琼脂平板上直接挑取数个可疑菌落，分别接种三糖铁琼脂在三糖铁琼脂内，肠杆菌科常见属种的反应结果见表2。表2   沙门氏菌属在三糖铁琼脂和赖氨酸脱羧酶试验培养基内的反应结果

斜面	底层	产气	硫化氢	赖氨酸脱羧酶试验培养基	可能的菌属和种
—	+	+（—）	+（—）	＋	可疑沙门氏菌属
－	+	+（—）	+（—）	－	可疑沙门氏菌属
＋	+	+（—）	+（—）	＋	可疑沙门氏菌属
＋	+	+/—	+/—	－	非沙门氏菌属
注：“+” 阳性；“—” 阴性；“+（—）”多数阳性，少数阴性；“+/—”阳性或阴性。

表2说明在三糖铁琼脂内斜面产酸，底层产酸，同时赖氨酸脱羧酶试验阴性的菌株可以排除，其它的反应结果均有沙门氏菌的可能，同时也均有不是沙门氏菌的可能。在接种三糖铁琼脂和赖氨酸脱羧酶试验培养基的同时，可直接接种蛋白胨水（供靛基质试验）、尿素琼脂（PH7.2）、氰化钾培养基，也可在初步判断结果后从营养琼脂平板上挑取可疑菌落接种，于36±1℃培养18～24小时，必要时可延长至48小时，按表3判定结果。将已挑菌落的平板储存于2℃～5℃或室温至少保留24h，以备必要时复查。表3   沙门氏菌属生化反应初步鉴别表

反应序号	硫化氢	靛基质	尿素	氰化钾	赖氨酸脱酸酶
A1	+	—	—	—	+
A2	+	+	—	—	+
A3	－	—	－	－	＋/—

反应序号A1：典型反应判定为沙门氏菌属。如尿素、氰化钾和赖氨酸3项中有1项异常，按表4可判定为沙门氏菌。如有2项异常为非沙门氏菌。表4　　沙门氏菌属生化反应初步鉴别表

尿素	氰化钾	赖氨酸脱酸酶	判 定 结 果
—	—	—	甲型副伤寒沙门氏菌（要求血清学鉴定结果）
—	+	+	沙门氏菌Ⅳ或Ⅴ（要求符合本群生化特性）
+	—	+	沙门氏菌个别变体（要求血清学鉴定结果）

               注：“+”表示阳性；“－”表示阴性。反应序号A2：补做甘露醇和山梨醇试验，沙门氏菌靛基质阳性变体两项试验结果均为阳性，但需要结合血清学鉴定结果进行判定。反应序号A3：补做ONPG试验，ONPG阴性为沙门氏菌，同时赖氨酸脱羧酶阳性，甲型副伤寒沙门氏菌为赖氨酸脱羧酶阴性。表5 沙门氏菌属各生化群的鉴别(必要时做，本鉴定盒没有提供整套相应的生化管，需另买单盒)

项目	I	II	III	IV	V	VI
卫矛醇	＋	＋	－	－	＋	－
山梨醇	＋	＋	＋	＋	＋	－
水杨素	－	－	－	＋	－	－
onPG	－	－	＋	－	＋	－
丙二酸盐	－	＋	＋	－	－	－
氰化钾（KCN）	－	－	－	＋	＋	－
注：“+”表示阳性；“—”表示阴性。