霉菌酵母菌检测板

1、原理及适用范围

  霉菌和酵母菌广泛存在于空气、水和土壤中，绝大部分对人体无害，但有些霉菌对人体有害，如黄曲霉，它分泌的黄曲霉毒素是一种强致癌物。霉菌还可引起食物霉变，会刺激人体消化道、胃部等，严重的还可损伤肝脏，造成食物中毒。霉菌酵母菌检测板由营养培养基、吸水凝胶和酶显色剂等组成。与传统方法相比，省去了配制培养基、消毒和培养器皿的清洗处理等大量辅助性工作，随时可以开始进行抽样检测，而且操作简便，通过酶显色剂的放大作用，使菌落提前清晰地显现出来，培养时间由一周缩短为48h，本品可用于各类食品及饮用水中霉菌和酵母菌的计数，非常适合于食品卫生检验部门和食品生产企业使用。执行标准：《食品安全国家标准 微生物学检验 霉菌和酵母计数》（GB 4789.15）

2、操作方法

2.1  样品处理：取样品 25 mL（g）放入含有225 mL无菌水的取样罐或均质袋内，充分摇匀，制成1:10的样品匀液，用1mL灭菌吸管吸取1:10样品匀液1mL，注入含有9mL无菌水的试管内，反复吸吹50次成为1:100的样品匀液，以此类推，根据对样品污染状况的估计，选择样品匀液的稀释度，每次换一支吸管。

2.2  接种：一般食品选2～3个稀释度进行检测，含菌量少的液体样品（如饮用纯水和矿泉水等）可直接吸取原液进行检测。将霉菌酵母菌检测板置于平坦实验台面，揭开上层膜，用无菌吸管吸取1mL样品匀液滴加到检测板内，迅速贴好上层膜并水平晃动检测板，使样品稀释液均匀吸附在滤纸上，静置10 s左右，待样品匀液完全被吸附在滤纸上。每个稀释度接种两片，做好空白阴性对照。

2.3  培养：将检测板叠在一起，倒置于恒温培养箱内。29℃±1℃，培养48～72 h。

3、结果判读

    霉菌和酵母菌在检测板上生长后会显示蓝色斑点，霉菌菌落显示的斑点略大呈放射状，酵母菌落则较小而圆滑，许多霉菌在培养后期会呈现其本身特有的颜色。选择菌落数适中（10～150CFU）的检测板进行计数，乘以稀释倍数后即为每毫升（克）样品中霉菌和酵母菌的数目。

4、计数原则及报告方式

4.1通常选择菌落在10～150CFU之间的检测板进行计数，取平均值乘以稀释倍数报告之（见例1）。

4.2若所有稀释度的平均菌落数均大于150 CFU，则对稀释度最高的检测板进行计数，乘以稀释倍数报告之，其他检测板可记录为多不可计（见例2）。

4.3若所有稀释度的平均菌落数均小于10 CFU，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之（见例3）。

4.4 若所有的稀释度（包括液体样品原液）均无菌落生长，则以小于1乘以最低稀释倍数报告之（见例4）。

5、附加说明

5.1  由于霉菌常以孢子的形式于空气中到处传播，而多种样品是要求霉菌酵母菌不得检出，因此检测霉菌时需特别小心操作，取样用品、稀释用水和吸管吸头等都需仔细消毒，接种时尽量避免空气流动，动作要干净利落，每次最好用无菌水接种两片空白对照，以免出现假阳性结果。

5.2  注意使用过的检测板上带有活菌，需及时按照生物安全废弃物处理原则进行处理。