蜂胶中化学成分的气相色谱法分析

 【摘要】目的建立辛夷药材中桉油精含量的测定方法方法，滕州华普采用水匀浆破碎，挥发油提取器中回流提取，ＦＦＡＰ毛细管色谱柱(３０ｍｍ×０．３２ｍｍ，０．３２μｍ)分离，火焰离子化检测器(ＦＩＤ)检测，以苯乙烯为内标，毛细管气相色谱法测定辛夷药材中桉油精的含量。结果在桉油精进样量为０．４～３．０ｍｇ时有良好的线性关系(r＝０．９９９８)；加标平均回收率为９９．３％，RSD为１．８％。结论加水匀浆破碎可有效地防止破碎过程中桉油精的挥发。不同产地辛夷药材桉油精含量相差很大。    　　　辛夷，又名紫玉兰、望春花，属木兰科木兰属落叶乔木［１］，其花蕾入药称辛夷。有散风寒、通鼻窍之功效［２］。辛夷挥发油是一种重要的天然香料，广泛用于医药、日化和香精香料等行业［３］。辛夷挥发油的测定及化学成分的质谱分析已有报道，提取方法有水蒸气蒸馏法［４］、浸膏法［５］、超临界ＣＯ２流萃取法［６］等，以上方法提取辛夷中挥发油时，样品的破碎对桉油精的回收率有很大的影响［４］。桉油精是辛夷挥发油的重要组成部分，国内对辛夷药材桉油精含量测定的相关报道很少，２００５版《中国药典》Ⅰ部附录ⅩＣ给出的桉油精含量测定法使用ＰＥＧ２０Ｍ＋ＯＶ－１７混装气相色谱填充柱，适用于成分不太复杂的药材和中成药中桉油精含量测定。辛夷药材挥发油的成分复杂，《中国药典》的方法不能使与桉油精相邻的峰分离。因此，本实验选用ＦＦＡＰ毛细管柱建立了辛夷药材中桉油精含量的气相色谱内标测定方法，采用匀浆破碎回流提取有效地防止了辛夷药材中桉油精的挥发，确保了测定结果的真实性和准确性。
    　　
    　　1仪器和材料
    　　
    　　华普GC-2013型气相色谱仪、ＦＩＤ检测器、N３０００色谱工作站；匀浆机(Ｔｈｅｖｉｒｔｉｓｃｏｍｐａｎｙ．Ｎｅｗｙｏｒｋ)，ＦＦＡＰ毛细管色谱柱。
    　　
    　　辛夷药材由贵阳中医学院提供和鉴定，分别采自河南、广西和贵州。
    　　
    　　化学对照品桉油精(０７８８－９２０２、供含量测定用、中国药品生物制品检定所)；苯乙烯(化学试剂、纯度大于９９％、无干扰测定峰)。其它试剂均为分析纯。
    　　
    　　2方法与结果
    　　
    　　2.1对照品溶液的配制准确称取对照品桉油精适量，用甲醇溶解后置于１０ｍｌ容量瓶中，配制成２０ｍｇ／ｍｌ的储备液，精密取出０．０５０ｍｌ储备液于５．０ｍｌ的０．２５ｍｇ／ｍｌ的苯乙烯－三氯甲烷内表液中，加水１ｍｌ，振摇提取０．５ｍｉｎ，离心，下层有机相为对照品溶液。
    　　
    　　2.2样品溶液的配制取辛夷药材１０ｇ，精密称量于匀浆罐中，加水１５０ｍｌ，匀浆，浆液及洗涤匀浆罐的水一并转移到２５０ｍｌ蒸馏瓶中，加入环己烷５．０ｍｌ，于挥发油提取器［７］中回流提取４ｈ，有机相收集于离心试管中，离心、将上清有机相转入１０ｍｌ容量瓶中，分别用２．５，２ｍｌ环己烷洗用过的提取器收集管和离心试管，离心、将上层有机相一并转入１０ｍｌ容量瓶中用环己烷定容为待测溶液，精密吸取待测溶液０．２５ｍｌ，内标溶液５．００ｍｌ，于１０ｍｌ具塞离心试管中，加水１．０ｍｌ，振摇提取０．５ｍｉｎ，离心，下层有机相为供试品溶液。
    　　
    　　2.3色谱条件用ＦＦＡＰ毛细管色谱柱(３０ｍｍ×０．３２ｍｍ，０．３２μｍ)；氮气(Ｎ２)为载气、柱前压８０ｋＰａ；汽化室温度２４０℃；检测器温度２４０℃；柱温：８０℃保留６ｍｉｎ，以４０℃／ｍｉｎ的速率升到２２０℃，保留２ｍｉｎ；以苯乙烯为内标在火焰离子化检测器(ＦＩＤ)上测定桉油精含量。
    　　
    　　根据对照品的保留时间定性，峰面积比计算桉油精的含量。
    　　
    　　2.4色谱柱和内标物的选择分别用ＳＥ－３０，ＳＥ－５４，ＯＶ－１７０１和大口径、小口径的ＦＦＡＰ毛细管柱进行对照品和样品的测定。结果表明，桉油精在大口径、小口径的ＦＦＡＰ毛细管柱的峰形都很好，但样品经大口径的ＦＦＡＰ毛细管柱分离，有一小峰不能与内标物分开。经各种内标物醋酸乙酯、冰片、萘和苯乙烯比较表明，苯乙烯能与其它峰完全分开且在恰当时间出峰。因此，选择苯乙烯为内标，色谱柱为小口径的ＦＦＡＰ毛细管柱。样品与对照品的分析图谱见图１。
    　　
    　　图１气相色谱图(略)
    　　
    　　2.5前处理方法的选择经不同前处理方法比较桉油精的挥发损失试验，结果表明：辛夷药材在４０～４５℃烘干４ｈ，其中的桉油精挥发损失约３０％；将辛夷药材在套环式撞击制样机中粉碎，撞击使样品破碎而同时发热，桉油精挥发损失３０％以上；破碎的样品于烧杯中室温下敞开放置５ｄ桉油精全部挥发。因此，本实验采用加水匀浆破碎，回流提取分析辛夷药材中的桉油精含量，有效地防止了辛夷药材中桉油精的挥发，测定结果比干法粉碎的结果要高。
    　　
    　　2.6提取时间的选择取辛夷药材１０ｇ，精密称量于匀浆罐中，加水１５０ｍｌ，匀浆，浆液及洗涤匀浆罐的水一并转移到２５０ｍｌ蒸馏瓶中，加入环己烷５．０ｍｌ，于挥发油提取器中回流提取，考察提取时间与提取率。结果见表１。
    　　
    　　表1辛夷药材中桉油精的提取率(略)
    　　
    　　从表１可知，采用匀浆破碎后，回流提取≤４ｈ时，随蒸馏时间的增长，出油率增高，蒸馏时间＞４ｈ后，延长蒸馏时间，出油率变化不大，且可能影响按油精的质量。因此，辛夷药材的最佳蒸馏时间为４ｈ。
    　　
    　　2.7线性关系考察配制桉油精标准溶液系列，桉油精加入量分别为０．４，０．８，１．２，１．６，２．０，２．５，３．０ｍｇ，加水１．０ｍｌ，内标液５．００ｍｌ，振摇提取０．５ｍｉｎ，离心，吸取下层２．０μｌ，注入气相色谱仪测定，以相对峰面积A’／对加入桉油精ｍ(ｍｇ)进行线性回归，在０．４～３．０ｍｇ范围内，线性方程为A’＝０．６６２２m＋０．０１４９(r＝０．９９９７)。
    　　
    　　2.8精密度试验与重现性实验取对照品溶液２．０μｌ，按色谱条件进行测定，连续进样５次，求出桉油精的相对峰面积，RSD为０．２２％。
    　　
    　　取同一个批号辛夷药材制成的供试品溶液５份各２．０μｌ，按色谱条件进行测定，连续进样５次，求出桉油精的相对峰面积，RSD为１．１２％。
    　　
    　　2.9回收率实验精密称取辛夷药材５ｇ，共计９份，分别加入桉油精２４．００，３０．００，３６．００ｍｇ，制备成供试品溶液，分别进样测定，记录色谱图。结果表２。
    　　
    　　表2回收率实验结果(略)
    　　
    　　2.10样品测定按本实验建立的方法测定了河南、广西和贵州不同产地的辛夷药材，结果表明，不同产地的药材中桉油精的含量差异很大。
    　　
    　　3结论
    　　
    　　本实验建立的加水均浆制样有效地防止了辛夷药材中桉油精的挥发，确保了测定结果的可靠性。
    关键词：蜂胶分析 蜂胶中化学成分