植物源性食品中208种农药及其代谢物残留量的测定
气相色谱-质谱联用法
1 范围
本标准规定了植物源性食品中208种农药及其代谢物(参见附录A）残留量的气相色谱-质谱联用测定方法。
本标准适用于植物源性食品中208种农药及其代谢物残留量的测定。
2 规范性引用文件
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GB 2763 食品安全国家标准 食品中农药最大残留限量
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法
3原理
试样用乙腈提取，提取液经固相萃取或分散固相萃取净化，植物油试样经凝胶渗透色谱净化，气相色谱-质谱联用仪检测，内标法或外标法定量。
4试剂和材料
除非另有说明，在分析中仅使用分析纯的试剂，水为GB/T 6682规定的一级水。
4.1 试剂
4.1.1乙腈（CH3CN,CAS号：75-05-8）。
4.1.2 乙酸乙酯（CH3COOC2H5,CAS号：141-78-6）：色谱纯
4.1.3 甲苯（C7H8,CAS号：108-88-3）：色谱纯
4.1.4 环己烷 (C6H12,CAS号：110-82-7）：色谱纯
4.1.5 氯化钠(NaCl,CAS号：7647-14-5)。
4.1.6 醋酸钠（CH3COONa,CAS号：6131-90-4）。
4.1.7 醋酸（CH3COOH,CAS号：55896-93-0）。
4.1.8 硫酸镁（MgSO4,CAS号：7487-88-9）。
4.1.9柠檬酸钠（Na3C6H5O7,CAS号：6132-04-3）。
4.1.10柠檬酸氢二钠（C6H6Na2O7,CAS号：6132-05-4）。
4.2 溶液配制
4.2.1乙腈-醋酸溶液（99+1）：量取10 mL醋酸加入990mL乙腈中，混匀。
4.2.2 乙腈-甲苯溶液（3+1）：量取100 mL甲苯加入300 mL乙腈中，混匀。
4.2.3GPC流动相：环己烷-乙酸乙酯溶液（1+1）：量取500 mL环己烷加入500 mL乙酸乙酯中，混匀。
4.3 标准品
环氧七氯B内标和208种农药及其代谢物标准品，参见附录A，纯度≥95%。
4.4 标准溶液配制
4.4.1标准储备溶液(1000 mg/L)：准确称取10mg(精确至0.1mg）各农药标准品，根据标准品的溶解性和测定的需要选丙酮或正己烷等溶剂溶解并定容至10mL，避光-18 ℃保存，有效期1年。
4.4.2混合标准溶液(混合标准溶液A和B）：按照农药的性质和保留时间，将208种农药及其代谢物分成A、B两个组。吸取一定量的农药标准储备溶液于250mL容量瓶中，用乙酸乙酯定容至刻度。混合标准溶液避光0℃～4℃保存，有效期1个月。
4.4.3内标溶液：准确称取10 mg环氧七氯B（精确至0.1 mg）用乙酸乙酯溶解后转移至10mL容量瓶中，定容混匀为内标储备液。内标储备溶液用乙酸乙酯稀释至5 mg/L为内标溶液。
4.4.4基质混合标准工作溶液：空白基质溶液氮气吹干，加入20μL内标溶液，加入1 mL相应质量浓度的混合标准溶液复溶，过微孔滤膜（4.5.6）。基质混合标准工作溶液应现用现配。
注：空白基质溶液取样量应与相应的试样处理取样量一致。
4.5 材料
4.5.1固相萃取柱：石墨化炭黑-氨基复合柱，500 mg/500 mg，容积6 mL。
4.5.2乙二胺-N-丙基硅烷化硅胶（PSA）：40～60μm。
4.5.3十八烷基硅烷键合硅胶（C18）：40～60μm。
4.5.4 石墨化炭黑（GCB）：40～120μm。
4.5.5陶瓷均质子：2cm（长）×1cm（外径）。
4.5.6微孔滤膜(有机相)：13 mm×0.22 μm。
5 仪器
5.1气相色谱-三重四极杆质谱联用仪：配有电子轰击源(EI）。
5.2 凝胶渗透色谱仪或装置：配有25mm（内径）×500mm，内装Bio-Beads SX-3填料或相当的净化柱。
5.3分析天平：感量0.1 mg和0.01 g。
5.4 高速匀浆机：转速不低于15 000 r/min。
5.5离心机：转速不低于4200r/min。
5.6组织捣碎机。
5.7 旋转蒸发仪。
5.8氮吹仪：可控温。
5.9涡旋混合器。
6 试样制备
6.1 试样制备
蔬菜和水果的取样量按照GB/T 8855规定执行，食用菌样品随机取样1 kg。样品取样部位按照GB 2763规定执行。对于个体较小的样品，取样后全部处理；对于个体较大的基本均匀样品，可在对称轴或对称面上分割或切成小块后处理；对于细长、扁平或组分含量在各部分有差异的样品，可在不同部位切取小片或截成小段后处理；取后的样品将其切碎，充分混匀，用四分法取样或直接放入组织捣碎机中捣碎成匀浆，放入聚乙烯瓶中。
取谷类样品500 g，粉碎后使其全部可通过425 μm的标准网筛，放入聚乙烯瓶或袋中。取油料作物、茶叶、坚果和香辛料各500 g，粉碎后充分混匀，放入聚乙烯瓶或袋中。
植物油类搅拌均匀，放入聚乙烯瓶中。
6.2 试样贮存
将试样按照测试和备用分别存放。于-18 ℃条件下保存。
7 分析步骤
7.1 QuEChERS前处理
7.1.1 蔬菜、水果和食用菌
称取10 g试样（精确至0.01 g）于50 mL塑料离心管中，加入10 mL乙腈、4 g硫酸镁、1 g氯化钠、1 g柠檬酸钠、0.5 g柠檬酸氢二钠及1颗陶瓷均质子，盖上离心管盖，剧烈震荡1 min后4200 r/min离心5 min。吸取6 mL上清液加到内含900 mg硫酸镁及150 mg PSA的15 mL塑料离心管中；对于颜色较深的试样，15 mL塑料离心管中加入885 mg硫酸镁、150 mg PSA及15 mg GCB，涡旋混匀1 min。4200 r/min离心5 min，准确吸取2 mL上清液于10 mL试管中，40℃水浴中氮气吹至近干。加入20 μL的内标溶液，加入1 mL乙酸乙酯复溶，过微孔滤膜（4.5.6），用于测定。
7.1.2 谷物、油料和坚果
称取5 g试样（精确至0.01 g）于50 mL塑料离心管中，加10mL水涡旋混匀，静置30min。 加入15 mL 乙腈-醋酸溶液（4.2.1）、6 g无水硫酸镁、1.5 g醋酸钠及1颗陶瓷均质子，盖上离心管盖，剧烈震荡1 min后4200 r/min离心5 min。吸取8 mL上清液加到内含1200 mg硫酸镁、400 mg PSA及400mg C18的15 mL塑料离心管中，涡旋混匀1 min。4200 r/min离心5 min，准确吸取2 mL上清液于10 mL试管中，40℃水浴中氮气吹至近干。加入20 μL的内标溶液，加入1 mL乙酸乙酯复溶，过微孔滤膜（4.5.6），用于测定。
7.1.3 茶叶和香辛料
称取2 g试样（精确至0.01 g）于50 mL塑料离心管中，加10 mL水涡旋混匀，静置30 min。加入15 mL 乙腈-醋酸溶液（4.2.1）、6 g无水硫酸镁、1.5 g醋酸钠及1颗陶瓷均质子，盖上离心管盖，剧烈震荡1 min后4200 r/min离心5 min。吸取8 mL上清液加到内含1200 mg硫酸镁、400 mg PSA、400mg C18及200 mg GCB的15 mL塑料离心管中，涡旋混匀1 min。4200 r/min离心5 min，准确吸取2 mL上清液于10 mL试管中，40℃水浴中氮气吹至近干。加入20 μL的内标溶液，加入1 mL乙酸乙酯复溶，过微孔滤膜（4.5.6），用于测定。
注：上述处理中净化前的上清液吸取量可根据需要调整，净化材料（无水硫酸镁、PSA、C18、GCB）用量按比例增减。
7.2固相萃取前处理
7.2.1 提取
7.2.1.1蔬菜、水果和食用菌
称取20g试样（精确至0.01 g）于100 mL塑料离心管中，加入40 mL乙腈，用高速匀浆机15000r/min匀浆2 min，加入5 g～7 g 氯化钠剧烈震荡数次，4 200 r/min离心5 min。准确吸取10 mL上清液于100 mL茄型瓶中。40 ℃水浴旋转蒸发至1 mL左右，氮气吹至近干，待净化。
7.2.1.2谷物、油料、坚果、茶叶和香辛料
称取5 g试样（精确至0.01 g）于100 mL塑料离心管中，加10 mL水涡旋混匀，静置30 min。加入20 mL乙腈，用高速匀浆机15000 r/min匀浆2 min，加入5 g～7 g 氯化钠剧烈震荡数次，4200 r/min离心5 min。准确吸取5 mL上清液于 100 mL茄型瓶中，40 ℃水浴旋转蒸发至 1 mL左右，氮气吹至近干，待净化。
7.2.2 净化
用5 mL乙腈-甲苯溶液（4.2.2）预洗固相萃取柱（4.5.1），弃去流出液。下接150 mL鸡心瓶，放入固定架上。将上述待净化试样用3mL乙腈-甲苯溶液（4.2.2）洗涤至固相萃取柱中，再用2 mL乙腈-甲苯溶液（4.2.2）洗涤，并将洗涤液移入柱中，重复两次。在柱上加上50 mL贮液器，用25 mL乙腈-甲苯溶液淋洗小柱，收集上述所有流出液于150 mL鸡心瓶中，40℃水浴中旋转浓缩至近干。加入50 μL内标溶液，加入2.5 mL 乙酸乙酯复溶，过微孔滤膜（4.5.6），用于测定。
7.3GPC前处理
称取1g食用油试样（精确至0.01 g）于10 mL 样品瓶中，加入GPC流动相（4.2.3）7 mL混匀，将试样溶液置于GPC仪上净化，上样体积为5 mL，流速为5 mL/min，收集1000s～2700s时间段的洗脱液。将流出液浓缩至5mL，准确吸取4mL于10 mL玻璃离心管中，40℃水浴中氮气吹至近干。加入20 μL的内标溶液，加入1 mL乙酸乙酯复溶，过微孔滤膜（4.5.6），用于测定。
7.4测定
7.4.1仪器参考条件
a) 色谱柱：14%腈丙基苯基-86%二甲基聚硅氧烷石英毛细管柱；30m×0.25mm×0.25μm，或相当者；
b) 色谱柱温度：40℃保持1 min，然后以40℃/min程序升温至120℃，再以5℃/min升温至240℃，再以12 ℃/min升温至300℃，保持6 min；
c) 载气：氦气，纯度≥99.999%，流速1.0 mL/min；
d) 进样口温度：280℃；
e)进样量：1μL；
f)进样方式：不分流进样；
g)电子轰击源：70eV；
h)离子源温度：280℃；
i)传输线温度：280℃；
j)溶剂延迟：3 min；
k)多反应监测：每种农药分别选择一对定量离子，一对定性离子。每组所有需要检测离子对按照出峰顺序，分时段分别检测。每种农药的保留时间、定量离子对、定性离子对和碰撞电压，参见附录B。
7.4.2 标准工作曲线
精确吸取一定量的混合标准溶液，逐级用乙酸乙酯释成质量浓度为0.005 mg/L、0.01 mg/L、0.05mg/L、0.1mg/L和0.5mg/L的标准工作溶液。空白基质溶液氮气吹干，加入20 μL内标溶液，分别加入1 mL上述标准工作溶液复溶，过微孔滤膜（4.5.6）配制成系列基质混合标准工作溶液，供气相色谱-质谱联用仪测定。以农药定量离子峰面积和内标物定量离子峰面积的比值为纵坐标，农药标准溶液质量浓度和内标物质量浓度的比值为横坐标，绘制标准曲线。
7.4.3 定性及定量
7.4.3.1保留时间
被测试样中目标农药色谱峰的保留时间与相应标准色谱峰的保留时间相比较，相对误差应在±2.5%之内。
7.4.3.2 定量离子、定性离子及子离子丰度比
在相同实验条件下进行样品测定时，如果检出的色谱峰的保留时间与标准样品相一致，并且在扣除背景后的样品质谱图中，目标化合物的质谱定量和定性离子均出现，而且同一检测批次，对同一化合物，样品中目标化合物的定性离子和定量离子的相对丰度比与质量浓度相当的基质标准溶液相比，其允许偏差不超过表1规定的范围，则可判断样品中存在目标农药。
表1 定性时相对离子丰度的最大允许偏差
相对离子丰度＞50%＞20%至50%＞10%至20%≤10%
允许相对偏差±20%±25%±30%±50%
本方法的A、B两组标准物质多反应监测GC-MS/MS图参见附录C。
7.4.3.3 定量
内标法或外标法定量。
7.5试样溶液的测定
将基质混合标准工作溶液和试样溶液依次注入气相色谱-质谱联用仪中，保留时间和定性离子定性，测得定量离子峰面积，待测样液中农药的响应值应在仪器检测的定量测定线性范围之内，超过线性范围时应根据测定浓度进行适当倍数稀释后再进行分析。
7.6平行试验
按以上步骤对同一试样进行平行试验测定。
7.7空白试验
除不加试料外，采用完全相同的测定步骤进行平行操作。
8 结果计算
试样中各农药残留量以质量分数ω计，数值以毫克每千克（mg/kg）表示，内标法按公式（1）计算，外标法按公式（2）计算。
式中：
ω---试样中被测物残留量，单位为毫克每千克（mg/kg）；
ρ---基质标准工作溶液中被测物的质量浓度，单位为微克每毫升（?g/mL）；
A--试样溶液中被测物的色谱峰面积；
As--基质标准工作溶液中被测物的色谱峰面积；
ρi--试样溶液中内标物的质量浓度，单位为微克每毫升（?g/mL）；
ρsi--基质标准工作溶液中内标物的质量浓度，单位为微克每毫升（?g/mL）；
Asi--基质标准工作溶液中内标物的色谱峰面积；
Ai--试样溶液中内标物的色谱峰面积；
V--试样溶液最终定容体积，单位为毫升（mL）；
m--试样溶液所代表试样的质量，单位为克（g）。
计算结果应扣除空白值，计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，保留两位有效数字，含量超1 mg/kg时保留三位有效数字。
9精密度
在重复性条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不得超过重复性限（r），参见附录D。
在再现性条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不得超过再现性限（R），参见附录D。
10 其他
本标准方法的定量限为0.01mg/kg～0.05mg/kg(参见附录A）。
