根据以上研究成果，提出对应的假设：中国人群的A.muciniphila定植率可能低于国外人群，因此需要通过一些方式去改变现状。暨南大学理工学院的王磊、姚泓和吴希阳*通过收集广东广州地区健康的成年人体粪便，分析A.muciniphila的定植情况；将团队设计的符合东方人饮食习惯的人体胃肠道微生态消化模拟系统为研究基础，选择3 个无A. muciniphila定植的志愿者粪便为接种物，进行1×108 CFU/mL丰度的A. muciniphila干预，通过宏基因组测序技术联合实时聚合酶链式反应（real-timePCR）系统研究A. muciniphila的干预所引起的肠道菌群变化。
A. muciniphila定植情况分析
经过real-time PCR分析，在131 人中有117 人A.muciniphila 定植阳性，定植率为89.31%，A.muciniphila定植平均丰度为5.825（lg（CFU/mL））。
菌属的real-time PCR标准曲线
总菌属标准曲线的菌落计数为4.52×109 CFU/mL，扩增效率为92.039%，标准曲线拟合度R2为0.999；Bifidobacterium标准曲线的菌落计数为2.56×108 CFU/mL， 扩增效率为90.509%，标准曲线拟合度R2为0.991；Lactobacillus标准曲线的菌落计数为4.74×109 CFU/mL，扩增效率为97.251%，标准曲线拟合度R2为0.995；Bacteroides标准曲线的菌落计数为5.645×108 CFU/mL，扩增效率为105.919%，标准曲线拟合度R2为0.997；Akkermansia标准曲线的菌落计数为3.84×108 CFU/mL，扩增效率为94.859%，标准曲线拟合度R2为1.0，所有菌属系数均为合理范围内，具有定量意义。
不同菌属real-time PCR定量结果
结果显示，与接种液中的总菌属比较，所有组的总菌属在14 h后丰度呈现显着性下降，说明营养物质开始出现不足。对照组的A. muciniphila未检测出，说明志愿者的粪便中不含A.muciniphila定植，即使在检测限外的丰度也不会出现大量增长；实验组（A1、A2）的A. muciniphila在14 h前保持初始的高丰度（7（lg（CFU/mL））以上），以及出现少量增长，说明A. muciniphila可以在肠道菌群环境中维持生长。
实验组（A1、A2）的Bacteroides属与Bifidobacterium属丰度均不断下降，说明A. muciniphila的加入可能增加了两者的生存压力；对照组的Bifidobacterium属的丰度出现波动性上升，说明无A. muciniphila的存在对其生长抑制性较小。在14 h前，实验组的Lactobacillus属的丰度均出现上升，但对照组的丰度降低，说明A.muciniphila可能对Lactobacillus属具有促进生长的作用。
发酵液16S rDNA测序分析
由样本菌属水平分析（图2）可知，实验组的Bacteroides属均总体呈现下降的趋势，对照组的24 h的Bacteroides呈现小幅上升，结果与real-time PCR的分析相匹配；24 h，实验组A1和A2的Lactobacillus属丰度比对照组要高，而Bifidobacterium属要低于对照组，整体趋势与real-timePCR的分析相似。
如图3所示，实验组A1和A2的菌种变化情况总体相同，说明测序结果平行性较好，其主要变化趋势为：发酵2、14 h和24 h，Bacillussubtilis相对丰度持续降低；两组Lactobacillus lactis相对丰度总体呈现增长；Oscillospiraceaebacterium VE202_24相对丰度均大量下降；Streptococcusgallolyticus subsp. macedonicus相对丰度均持续增长；Lachnospiraceaebacterium 615相对丰度较为稳定。
对照组S. gallolyticus subsp. macedonicus相对丰度在2 h和14 h呈现大量增长后，24 h降低到低于2 h；L. vaginalis、L.lactis和L. johnsonii均在小幅增长后，大量降低；Oscillospiraceae bacterium VE202_24相对丰度显着下降；Enterococcus faecalis持续增长，成为相对丰度最高的菌属。
实验组与对照组的对比可知，A. muciniphila加入到稳定的肠道微生态中，主要使L. vaginalis、L. lactis和L. johnsonii呈现增殖，趋势与real-time PCR的检测结果匹配。对照组因为无明显优势菌群的存在，可能使容易生存的菌种生长较快，如E. faecalis和S. gallolyticus，让营养来源单一的菌种逐渐衰亡，如Oscillospiraceae bacterium VE202_24。Oscillospiraceaebacterium主要吸收宿主聚糖存活，而发酵液中的关键营养成分为Mucin，结构中有大部分为聚糖，但因A. muciniphila的干预使黏蛋白大量消耗，因此可能使这类菌种营养物质匮乏。
主坐标分析
从图4可知，按照时间点分组，2、14 h和24 h的空间距离较大，显示样本群的差异较大；按照实验组和对照组分析，组间距离较小，相同时间点的样本聚在一起，显示其差异较小。因此在菌落总体结构上，A. muciniphila添加后对肠道微生态的结构无显着影响，说明其对肠道菌群组成没有破坏性。
结论与讨论
在广州地区人群的A. muciniphila定植率为89.31%，平均丰度为5.825（lg（CFU/mL））。肠道消化模拟不同时间点的real-time PCR结果显示，A. muciniphila在模拟人类肠道微生物菌群环境中具备生存能力；对Bifidobacterium属和Bacteroides属具有抑制效果，对Lactobacillus属具有促进作用。16S rDNA基因组测序结果显示：实验组L. lactis、S. gallolyticus subsp. macedonicus相对丰度均呈现增长，Oscillospiraceae bacterium VE202-24相对丰度大幅降低，Lachnospiraceaebacterium 615相对丰度较为稳定；在菌落总体结构上，A. muciniphila添加后对肠道微生物菌群的结构无显着影响，说明其对肠道菌群组成没有破坏性。
本研究选择无A. muciniphila定植的肠道菌群作为接种液，再添加一定丰度的A. muciniphila活菌进行干预，但有报道表明1%～5%为接近最健康人群的丰度。这是本研究疏漏的一个需要探究的点，未来将进行改进。本研究采用时长为24 h的肠道消化模拟系统，仅能作为参考评估A. muciniphila对肠道菌群的作用。今后应设置长时间段的评估实验，其中包括3～5 d的菌群稳定期和7 d以上的长期定植评估等。本研究中，A. muciniphila添加到新的肠道微生物菌群中，可能增加了营养物质的消耗，尤其是黏蛋白的利用，使需要黏蛋白作为能源的菌群生长受到抑制。在14 h后总菌数出现大幅下降，说明营养物质开始缺乏，使营养要求不高的肠道菌群丰度出现额外的增长，生存竞争能力较强；16S rDNA基因组测序结果显示14 h后Escherichia Shigella属出现明显增长，可能对其他菌属有限制或竞争作用，影响菌群的结构组成。但由总体菌落结构可知，A. muciniphila的添加对肠道微生物菌群的结构无显着性破坏作用，表明其可能具备活菌摄入的基本要求。
对于低丰度或无A. muciniphila定植的人群，需找出对应的合理方式帮助A. muciniphila定植或者大量增长。利用体外肠道消化系统探究A.muciniphila在肠道中初次定植更具有参考价值。本研究完成A. muciniphila在人体肠道微生态的变化评估，还需对体内进一步深入研究，因此将此类肠道微生态移殖到无菌动物模型中，再摄入A. muciniphila活菌可能更具合理性，这也是本团队后续的研究工作之一。
