氟苯尼考是一种新型的兽医专用氯霉素类广谱抗菌药，逐渐取代传统氯霉素，普遍应用于家畜禽等各种传染性疾病的治疗。近年来，食品中的氟苯尼考残留对人类的健康造成了极大的威胁，也引起许多国家食品安全检验单位的注意。
表1氟苯尼考样品信息
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样品名称 |
英文名 |
结构式 |
分子式 |
分子量 |
CAS编号 |
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氟苯尼考 |
Florfenicol |
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C12H14Cl2FNO4S |
358.2 |
73231-34-2 |
二、适用范围
适用于牛奶、奶粉中氟苯尼考的检测。
三、实验部分
仪器、试剂与材料
主要仪器设备
高效液相色谱仪，紫外检测器，SPE固相萃取装置，氮气吹干仪，超声清洗仪，涡旋振荡仪，离心机。
试剂材料
浓缩牛奶，氟苯尼考标品，正己烷、乙腈（均为色谱纯），甲醇、乙酸乙酯、无水硫酸钠、氨水（均为分析纯）。
色谱柱：ZKAT-C18（5 μm，120 Å，4.6×250 mm，订货号：152200542）
四、样品制备
样品提取
准确称取牛奶2 g（精确到0.001），加入乙酸乙酯15 mL，高速匀质1 min，加入5 g无水硫酸钠，涡旋振荡1 min，摇床振荡10 min。4000 r/min转速离心5 min。将上清液转移至圆底烧瓶中，于45 ℃旋蒸至近干，用6 mL水溶解残渣，5 mL×2次正己烷除脂，静置分层，弃去正己烷层，取3 mL水层净化。
SPE柱净化
（1）活化：C18固相萃取柱使用前依次用5 mL甲醇、5 mL水活化。
（2）上样：将待净化液加入已活化好的固相萃取柱中，以2 mL/min的流速过柱，弃去滤液。
（3）淋洗：用5 mL水淋洗固相萃取柱，弃去淋洗液，抽干5 min（真空压力22 KPa）。
（4）洗脱：用5 mL 5%氨化甲醇洗脱固相萃取小柱，收集洗脱液。
（5）重新溶解：洗脱液于45 ℃氮吹吹干，用1 mL甲醇定容，0.45 μm微孔滤膜过滤，供HPLC测定。
五、添加回收结果
牛奶基质中氟苯尼考添加水平（5 mg/kg）的回收结果
表2 牛奶基质中氟苯尼考添加水平（5 mg/kg）的回收结果
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目标物 |
进样次数 |
回收率(%) |
平均回收率(%) |
RSD(%) |
|
氟苯尼考 |
1 |
97.55 |
101.02 |
3.20 |
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2 |
100.51 |
|||
|
3 |
105.02 |
图1 添加水平为5 mg/kg牛奶基质中氟苯尼考的液相色谱图
液相色谱条件
色 谱 柱：ZKAT-C18（5 μm ，120 Å，4.6×250 mm，订货号：152200542）
检 测 器：UV3000型紫外/可见光检测器
检测波长：UV 224 nm
流 动 相：乙腈/水 = 17/83（v/v）
流 速：1.0 mL/min
柱 温：25 ℃
进 样 量：20 μL
六、结论
采用此方法进行乳制品中氟苯尼考含量的液相测试，添加回收率达到101.02%，表明AE.SPE-C18固相萃取小柱及ZKAT-C18柱适于乳制品中氟苯尼考的纯化和测试。
