热搜: 食品  奶粉  烟台  海产品  保健品  周黑  黑窝点  黑作坊  全聚德  小龙虾 
 

特异性检出活菌的分子检测方法

放大字体  缩小字体 发布日期:2017-06-01
核心提示:通常情况下,微生物检测最常用的方法有传统的培养方法和不经培养直接进行分子检测方法。
   通常情况下,微生物检测最常用的方法有传统的培养方法和不经培养直接进行分子检测方法。
 
  传统的培养方法的优点为检测对象都为活菌(因为死菌不可培养),但是它的缺点是耗时较长以及容易造成假阴性,这是由于大部分环境中的微生物处于“VBNC”(viable but nonculturable)状态,这种状态的细菌不能进行培养,却仍旧保存活力,经过一定条件的复苏可以重新恢复活力,采用培养法检测,会造成漏检。
 
  而不经培养直接进行分子检测是对微生物的DNA进行检测,因其高灵敏度和快捷等优点,广受各实验室青睐。但是在实际检测过程中,该方法容易造成假阳性,如死菌的DNA还未彻底降解,而这类DNA容易被分子方法检测到。
 
  为了更好的发挥分子检测的优势,我所研究人员开发了一套独特的检测方法(TK II),用来克服死菌造成的假阳性问题。我们构建了四组分子检测实验:
 
  1.死菌(浓度从107~101),采用普通分子检测流程(TK I);
 
  2.活菌(浓度从107~101),采用普通分子检测流程(TK I)。
 
  3.死菌(浓度从107~101),采用我们特殊的分子检测流程(TK II);
 
  4.活菌(浓度从107~101),采用我们特殊的分子检测流程(TK II)。
 
  实验结果见下图,当死菌的浓度在106~103 CFU/mL之间时,利用TK II 检测方法,均为阴性,而用该方法对活菌进行检测时,检测结果不受影响,即和TK I 检测结果一致。
 
  这套体系的建立,显着的克服了分子检测容易造成假阳性的缺点,为我所的分子检测的发展也奠定了一个良好的基础。
  ( TK I 与TK II 检测结果 )
 
  M:100bp DNA ladder;
 
  1~4:菌液浓度为107 CFU/mL;
 
  5~8:106 CFU/mL;
 
  9~12:105 CFU/mL;
 
  13~16:104 CFU/mL;
 
  17~20:103 CFU/mL;
 
  21~24:102 CFU/mL;
 
  25~28;101 CFU/mL;
 
  29:NTC
 
  1、5、9、13、17、21、25:TK I;
 
  2、6、10、14、18、22、26:TK I;
 
  3、7、11、15、19、23、27:TK II;
 
  4、8、12、16、20、24、28:TK II。
 
 
[ 检测应用搜索 ]  [ 加入收藏 ]  [ 告诉好友 ]  [ 打印本文 ]  [ 违规举报 ]  [ 关闭窗口 ]

 
0条 [查看全部]  相关评论

 
推荐图文
推荐检测应用
点击排行
  

鲁公网安备 37060202000213号