上海理工大学医疗器械与食品学院的王淑娟、刘程、许东坡*和刘箐*等人以大肠杆菌O157:H7为检测对象，结合金属有机骨架材料（ZIF-67）的催化性能，替代传统的HRP对抗体进行标记，并通过磁性微球富集目标物，建立一种新型的基于双抗体夹心法的牛奶中大肠杆菌O157:H7的快速定量检测方法。该方法旨在尝试将金属有机骨架材料与食源性致病菌检测相结合，建立食源性致病菌检测方法。
ZIF-67的合成与结果
合成的ZIF-67为绿色粉末，SEM图谱（上图a）ZIF-67为规则的纳米薄片，尺寸约500 nm，XRD（上图b）结果表明ZIF-67的结晶度较好。
ZIF-67与HRP催化性能的比较
如上图所示，H2O2存在时，ZIF-67和HRP都可以催化TMB显色，说明ZIF-67具有过氧化物酶样催化性能。而在H2O2不存在时，HRP不能催化TMB显色，而ZIF-67依然可以催化TMB显色。
温度、pH值、反应时间、TMB浓度
对ZIF-67催化性能的影响
ZIF-67催化TMB显色不需要H2O2即可完成，所以不再讨论H2O2浓度对其催化性能的影响。结果表明，ZIF-67催化反应最佳条件为室温、200 μmol/L TMB、0.5 mol/L硫酸终止液，且该催化作用不受时间的限制。基于以上最佳反应条件，以ZIF-67浓度为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线，结果表明ZIF-67自身线性良好，R2为0.994 7。
定量检测大肠杆菌O157:H7方法的建立
由于氨基功能化磁性微球本身在无H2O2时不可催化TMB显色，所以本实验通过沉淀显色法：即通过氨基功能化磁性微球特异性富集大肠杆菌O157:H7后，检测与其结合的ZIF-67的量，从上节可知，ZIF-67本身线性良好，说明可以通过ZIF-67的量间接检测大肠杆菌O157:H7的量。通过上述方法，以大肠杆菌O157:H7浓度为横坐标，A-A0为纵坐标，建立大肠杆菌O157:H7浓度梯度标准曲线。大肠杆菌O157:H7的检测线性浓度范围为17～1.7×108CFU/mL（平板计数结果）。检测限通过计算3σ（σ为空白样品测量的标准偏差）为17 CFU/mL。R2为0.990 6，说明该方法可以用于大肠杆菌O157:H7的定量检测，且线性结果良好。
人工污染牛奶中大肠杆菌O157:H7检测及方法的特异性
对人工污染大肠杆菌O157:H7的牛奶样品，选取4 个稀释度（3.3×102～3.3×105），按照上述方法进行检测，与大肠杆菌O157:H7显色平板上的检测结果进行对比，该方法的检测结果与平板计数结果一致，相对标准偏差为6.73%～11.4%，回收率为100%～105%。而且与常见的食源性致病菌进行对比，该方法的特异性强。
与其他检测大肠杆菌O157:H7方法的比较
与其他方法相比，本实验中的新型基于ZIF-67催化显色的免疫学方法检测大肠杆菌O157:H7的检测范围宽，检测限和PCR及其他高灵敏度传感器检测方法一致，且不需任何昂贵的仪器设备，操作简单、检测时间短、无需样品前增菌和预富集。
结 论
本研究建立了一种基于金属有机骨架材料（ZIF-67）催化性能的快速检测牛奶中大肠杆菌O157:H7的方法。该方法的检测范围为17～1.7×108CFU/mL，检测限为17 CFU/mL。该方法是通过检测与大肠杆菌O157:H7结合的ZIF-67的量间接确定细菌数量的定量检测，检测过程可在1 h内完成。和其他检测方法相比，无需昂贵仪器及对样品的前处理。因此，该方法是一种特异性高、快速、灵敏度高的双抗体夹心免疫学检测方法，为大肠杆菌O157:H7的快速检测开辟了新途径，在食品检测领域具有很好的发展前景。
