（1）培养基灭菌后，需冷却至50℃左右时才能倒平板。
（2）左手拿培养皿，右手拿锥形瓶，左手拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，不要完全打开。
（3）整个操作在酒精灯火焰旁进行，避免杂菌污染。
（4）平板冷却后要倒置的原因：防止皿盖上的冷凝水落入培养基，造成污染。
（5）若倒平板时，培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板应丢弃。
二、平板划线操作
（1）第一次划线及每次划线之前都要灼烧灭菌，划线操作结束仍需灼烧接种环，每次灼烧目的总结如下表：
（2）灼烧接种环之后，要冷却后才能伸入菌液，以免温度太高杀死菌种。
（3）划线时最后一区域不要与第一区域相连。
（4）划线用力要大小适当，防止用力过大将培养基划破。
三、稀释涂布平板
（1）稀释操作时：
每支试管及其中9mL水、移液管均需灭菌；操作时，试管口和移液管应在离火焰1－2cm处。
（2）涂布平板时：
①涂布器用70％酒精消毒，取出时，多余酒精在烧杯中滴尽，沾有少量酒精的涂布器在酒精灯火焰上引燃。
②不要将过热的涂布器放在盛放酒精的烧杯中，以免引燃其中的酒精。
③酒精灯与培养皿距离要合适，移液管头不要接触任何物体。
