绿脓菌素测定是鉴定铜绿假单胞菌的小实验，虽说小，但要做得干净漂亮，也是要见真功夫的。哪些真功夫？且听小编道来。
要点解析
1先来科普
铜绿假单胞菌广泛分布于土壤、水体、空气、动物粪便等环境中，但在矿泉水、深层地下水中一般不存在铜绿假单胞菌，除非受到人畜粪便的污染。由于具有较强的耐药性，铜绿假单胞菌成了医院院内感染的常见菌之一。另外，因为可引起术后伤口和眼部严重感染，铜绿假单胞菌也是国内外化妆品安全标准中，规定不得检出的微生物。
铜绿假单胞菌可产生三种水溶性色素：绿脓菌素（pyocyanin）、绿脓菌红素（pyorubin）和脓绿素(pyoverdin)，其中绿脓菌素是最具特征性的，因为铜绿假单胞菌是目前发现唯一产绿脓菌素的细菌。因此，绿脓菌素测定成了鉴定铜绿假单胞菌的“绝招”。然而，也有些铜绿假单胞菌不产绿脓菌素，有统计发现临床上约有4%的分离株是不产绿脓菌素的。另外，多次传代还可使菌株丧失产生绿脓菌素的能力，这点要引起注意。
2再划重点
绿脓菌素的化学名为：n-甲基-1-羟基吩嗪（n-methyl-1-hydroxyphenazine），其易溶于水及氯仿。pH值>5时显蓝色，pH值<5时显红色。铜绿假单胞菌在不含磷酸盐的培养基，如绿脓菌素测定培养基，国外称为假单胞菌琼脂P（Pseudomonas agar P），36℃培养24小时即可产生绿脓菌素。但有些菌株的培养时间需要延长至48小时，才产绿脓菌素。采用固体培养基培养时，产生的绿脓菌素还会扩散并渗入琼脂中。
在《化妆品安全技术规范》以及GB/T 7918.4-1987《化妆品微生物标准检验方法 绿脓杆菌》中，描述了绿脓菌素的测定方法，具体如下：
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方法讲的很详细，但是看着明白，用时未必清楚。往往按以上秘笈操作，任督二脉未通的高手也会马失前蹄。肿么办？
3放大招了
其一，铜绿假单胞菌产生的绿脓菌素会渗入琼脂中，有时在绿脓菌素测定培养基斜面中直接加入氯仿，未必就能一招致胜。遇到这种情形，新加盟的恒山派小师妹一准懵圈：斜面明明是蓝色的，氯仿为嘛不变蓝涅。若逢比武大会，裁判老师又在读秒，小师妹难免吓得花容失色、香汗淋漓，不禁要娇声惊呼：令狐师兄救我……
师妹，不用大侠助阵，小编来教你一招：
抄一件称手的兵器（最好是无菌玻棒），将那绿脓菌素测定培养基的斜面部分捣碎。加入氯仿后，玉手盈盈捏住试管轻轻一摇，再狡猾善变的“蓝色妖姬”也会乖乖现形！
其二，有些菌株产生绿脓菌素的能力较弱，氯仿萃取后加入稀盐酸，红色不明显，此时容易误判为阴性结果。那星宿派摩羯座的老司机，也曾因此遭了暗算，以致功亏一篑，不由得扼腕仰天长叹。
其实针对这种暗器，小编也有独门解药滴！
那就是：一张白纸！
氯仿萃取加稀盐酸振荡后静置，用一张白纸放在试管后面观察：那一抹桃红哟，犹如兑了鸡血的cocktail ！
其三，还有些铜绿假单胞菌培养要超过24小时，甚至要到48小时，才产生绿脓菌素。面对这种阵式，有着十几年易容化妆经验的霍都王子，也百思不得其解，最终走火入魔，掉进了坑里……
内谁，先在坑里歇会儿，等小编慢慢来救你哈。
首先，接种两支绿脓菌素测定培养基斜面。置36℃培养24小时后，取一支进行绿脓菌素测定。阴性者将另一支斜面置36℃继续培养24小时，再进行绿脓菌素测定。结果妥妥的！
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参考文献：
1. LM Ringen ，CH Drake. A study of the incidence of Pseudomonas aeruginosa from various natural sources [J]. Journal of Bacteriology, 1952 , 64 (6) :841-845.
2. EA Reyes，MJ Bale， WH Cannon， JM Matsen. Identification of Pseudomonas aeruginosa by pyocyanin production on Tech agar [J]. Journal of Clinical Microbiology, 1981 , 13 (3) :456-458.
3. WL Gaby，E Free. Occurrence and identification of nonpigmented strains of Pseudomonas in the clinical laboratory. [J]. Journal of Bacteriology, 1953 , 65 (6) :746.
