当前生态环境污染的日益严重以及精神、物质生活压力的增加直接或间接地导致了人体内自由基含量的增加。因此，对控制机体内自由基数量的研究是非常必要的。
来自湖南农业大学园艺园林学院的石 浩、王仁才、吴小燕等人以湖南省浏阳市大围山软枣猕猴桃为原料，运用噻唑蓝（MTT）法，以细胞内超氧化物歧化酶（SOD）活力、活性氧簇（ROS）水平为评价指标，考察软枣猕猴桃黄酮类物质对HaCaT细胞的抗氧化作用，为软枣猕猴桃天然抗氧化功能产品的开发提供依据。
1. 黄酮及VC质量浓度筛选结果
1.1 黄酮质量浓度的筛选结果
在0.1～1.0 mg/mL质量浓度范围内，与空白组（0.0 mg/mL）相比，0.1、0.3、0.4、0.6、0.8 mg/mL的黄酮对细胞活性影响较小，细胞相对存活率均保持在100%左右，所以选择这5 个黄酮质量浓度进一步研究其对H2O2诱导的细胞氧化损伤的预保护作用。
1.2 VC质量浓度的筛选结果
不同质量浓度的VC对HaCaT细胞生物活性的影响具有一定差异性。在0.01～0.08 mg/mL质量浓度范围内，与空白组（0.00 mg/mL）相比，0.07 mg/mLVC相对于其他质量浓度 而言对细胞活性影响最小，细胞相对存活率更接近100%，所以选择此VC质量浓度进一步研究其对H2O2诱导的细胞氧化损伤的预保护作用。
2. H2O2氧化损伤模型的建立结果
在2～15 μmol/L浓度范围内，随着H2O2浓度的增加，细胞活性总体呈现缓慢下降趋势，但不明显。当H2O2浓度达到20 μmol/L时，对细胞造成了一定的损伤，此时细胞相对存活率为80%左右。当H2O2浓度为30 μmol/L时，细胞的损伤率已十分明显，此时细胞相对存活率小于40%，故选用此浓度诱导HaCaT细胞的氧化损伤模型，以进行进一步的预保护研究。
3. 黄酮及VC对H2O2氧化损伤模型的预保护作用
当黄酮质量浓度分别为0.3、0.6 mg/mL时，对H2O2诱导的HaCaT细胞氧化损伤的预保护作用最强，其细胞相对存活率均为60%左右。0.07 mg/mL VC产生的预保护效果稍强于黄酮，细胞相对存活率达69%左右。选择黄酮物质量浓度0.3、0.6 mg/mL分别作为黄酮低、高质量浓度组，与0.07 mg/mL VC组进行后续的相关研究。
4. 黄酮及VC对细胞内SOD活力的影响
当采用30 μmol/L H2O2诱导细胞产生氧化损伤后，SOD活力非常低，大约只有空白对照组SOD活力（10.14 U/mg）的1/3。当加入VC及黄酮对细胞进行预保护后，细胞内的SOD活力有所增加，两者相对于模型组均表现出显着性差异，其中VC组增加了139.30%，黄酮低质量浓度组增加了85.63%，这表明黄酮及VC对H2O2造成的HaCaT氧化损伤有较好的预保护作用，VC抗氧化活性稍强于黄酮。黄酮高质量浓度组与黄酮低质量浓度组对HaCaT细胞的保护作用不具有显着性差异，也间接说明较低质量浓度黄酮对HaCaT细胞同样具有较强的抗氧化活性。
5.黄酮及VC对细胞内ROS水平的影响
用30 μmol/L H2O2诱导氧化损伤模型后，细胞内的ROS水平明显增高，相对于空白对照组（393.56），模型组的ROS水平（677.80）增加了近1 倍；当加入抗氧化物质黄酮、VC进行预保护后，细胞内的ROS水平较模型组均有一定程度的降低，黄酮高质量浓度组降低了12.65%、VC组降低了17.65%，表明黄酮及VC对H2O2诱导的HaCaT细胞氧化损伤有一定的预保护作用。但相对于空白对照组，黄酮及VC组ROS水平均具有一定程度的升高，从而说明两者对H2O2诱导的HaCaT细胞氧化损伤的预保护作用并不完全。黄酮对HaCaT细胞的预保护作用稍低于VC，黄酮高质量浓度组与黄酮低质量浓度组对HaCaT细胞的预保护作用效果相差不大。
结 论
当H2O2浓度为30 μmol/L时，细胞相对存活率为40%左右，较好地诱导了HaCaT细胞氧化损伤模型。当加入黄酮类化合物对细胞进行预保护后，质量浓度0.3、0.6 mg/mL的黄酮处理组细胞相对存活率为60%左右，较模型组均提高了20%左右。0.3 mg/mL黄酮处理组细胞内SOD活力（6.33 U/mg）较模型组升高了约1 倍，且存在明显差异（P＜0.05）；ROS水平显着下降，与模型组（677.80）相比下降了13%左右。说明软枣猕猴桃中黄酮类化合物对H2O2造成的氧化损伤具有一定的预保护作用，可进一步将其开发成相应的天然抗氧化剂产品投入市场。
