酸枣别名野枣,枣属植物,是枣的原生种,在我国分布较广,是生长于我国北方的野生药用植物资源,有着很高的营养价值和药用价值,富含糖、有机酸、维生素和多种酚类化合物。近年来,有研究证明酸枣具有防病抗衰老与延年益寿的作用,这些与酸枣中的多酚类物质密不可分。来自山西大学生命科学学院的李汉卿、刘丰铭、李卓玉*和山西大学生物技术研究所、化学生物学与分子工程教育部重点实验室的单树花等人以酸枣肉、酸枣仁、酸枣叶为原材料,运用不同方法提取自由态和结合态多酚,对其不同方法提取的多酚质量浓度进行了测定,并研究了各种多酚对HASMC表型转化的影响,为动脉粥样硬化的预防和治疗提供一定的理论参考。
1、酸枣肉、酸枣仁、酸枣叶自由态及结合态多酚质量浓度
酸枣叶中多酚质量浓度排序依次为:ZSLFP-E>ZSLBP-2-E>ZSLBP-1-E;酸枣肉中多酚质量浓度排序依次为:ZSFFP-E>ZSFBP-1-E>ZSFBP-2-E;酸枣仁中多酚质量浓度排序依次为:ZSSFP-E>ZSSBP-1-E>ZSSBP-2-E。酸枣肉、酸枣仁和酸枣叶中自由态多酚质量浓度均高于结合态多酚。自由态多酚中ZSLFP-E得率最高,结合态多酚中ZSLBP-2-E得率最高。
2、酸枣肉、酸枣仁、酸枣叶多酚对HASMC表型转化的影响
用提取的9 种多酚(终质量浓度0.25 mg/mL)分别处理HASMC 24、48 h并观察其表型转化。6 种结合态多酚处理组与对照组、AngII处理组对比,ZSSBP-2-E处理组的HASMC形态明显向收缩型转变,ZSLBP-1-E影响HASMC的存活率,因此未统计HASMC细胞表型转变;随时间的延长,ZSSBP-2-E处理组的HASMC形态进一步向收缩型转变;3 种自由态多酚处理组与对照组、AngII处理组对比,ZSLFP-E处理组的HASMC形态明显向收缩型转变;随时间的延长,ZSLFP-E处理组的HASMC形态进一步向收缩型转变。以上结果表明,9 种多酚中,ZSSBP-2-E和ZSLFP-E可以使HASMC明显由合成型转变为收缩型,并且呈现时间依赖性。
3、不同质量浓度ZSSBP-2-E和ZSLFP-E对HASMC表型转化的影响
为了解不同质量浓度的ZSSBP-2-E和ZSLFP-E对HASMC形态的影响,用不同质量浓度梯度的ZSSBP-2-E和ZSLFP-E处理HASMC并观察其表型转化,随着ZSSBP-2-E和ZSLFP-E质量浓度的增加,HASMC形态向收缩型转变更加明显,同时随着ZSSBP-2-E和ZSLFP-E质量浓度的增加,收缩型细胞数量在增加。以上结果表明:ZSSBP-2-E和ZSLFP-E可以使HASMC由合成型转变为收缩型,并且呈现质量浓度梯度依赖性。
4、荧光染色实验观察ZSLFP-E和ZSSBP-2-E对HASMC表型转化的影响
为了更加直观地观察ZSLFP-E和ZSSBP-2-E对HASMC表型的转化作用,用FITC标记鬼笔环肽对HASMC细胞骨架进行染色,用DAPI对HASMC细胞核进行染色,通过Delta Vision Elite系统观察HASMC形态。用ZSLFP-E和ZSSBP-2-E两种药物分别处理HASMC后,细胞形态明显向收缩型转变。
结 论
3种自由态多酚中,酸枣叶自由态多酚(ZSLFP-E)得率最高,结合态多酚中酸消化法提取的酸枣叶结合态多酚(ZSLBP-2-E)得率最高;ZSLFP-E和酸消化法提取的酸枣仁结合态多酚(ZSSBP-2-E)可以明显促进HASMC的形态由合成型(峰谷状)向收缩型(梭形)转变,且呈现时间和剂量依赖性。因此,ZSLFP-E和ZSSBP-2-E可以有效促进HASMC由合成型向收缩型转变,在动脉粥样硬化的预防和治疗中具有一定的应用前景。