本方法规定了食品中吗啡、可待因成分的胶体金免疫层析快速检测方法。
本方法适用于经液体调味料、火锅底料、麻辣烫底料或其他食用汤料等勾兑、调配或添加形成的液体食品；经调味酱、调味油脂、火锅底料、麻辣烫底料、蘸料、酱油或其他半固体调味料等勾兑、调配或添加形成的半固体食品；经香辛香料、复合调味料等勾兑、调配或添加形成的固体食品；以及配制醋或调味醋等食用醋中吗啡、可待因成分的快速测定。
2 原理
本方法采用竞争抑制免疫层析原理。样品中的吗啡、可待因成分经水提取后与胶体金标记的特异性抗体结合，抑制抗体和检测线（T线）上抗原的结合，导致检测线颜色深浅的变化。通过检测线与控制线（C线）颜色深浅比较，对样品中吗啡、可待因成分进行定性判定。
3 试剂与材料
除另有规定外，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的三级水。
3.1 试剂
甲醇。
3.2 参考物质
吗啡、可待因参考物质的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子质量见表1，纯度均≥99%。
表1吗啡、可待因参考物质中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子质量
3.3 标准溶液配制
3.3.1 吗啡、可待因标准储备液（1mg/mL）：精密称取适量吗啡、可待因参考物质（3.2），用甲醇（3.1）溶解并稀释至刻度，摇匀，分别制成浓度为1mg/mL的吗啡、可待因标准储备液。-20℃避光保存，有效期1年。
3.3.2 吗啡、可待因标准中间液（10μg/mL）：精密量取吗啡、可待因标准储备液（1mg/mL）（3.3.1）1mL分别置于100mL容量瓶中，用甲醇（3.1）稀释至刻度，摇匀，制成浓度为10μg/mL的吗啡、可待因标准中间液。-20℃避光保存，有效期3个月。
3.3.3 吗啡、可待因标准工作液（1μg/mL）：精密量取吗啡、可待因中标准间液（10μg/mL）（3.3.2）1mL分别置于10mL容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，制成浓度为1μg/mL的吗啡、可待因标准工作液。4℃避光保存，有效期1个月。
3.4 材料
吗啡、可待因胶体金免疫层析检测卡（条），适用基质为食品。
4 仪器和设备
4.1 天平：感量为0.01g。
4.2 环境条件：温度10℃-40℃，相对湿度≤80%。
5 分析步骤
5.1 试样制备
取适量样品，液体样品或半固体样品充分混匀，固体样品充分粉碎混匀。
5.2 试样提取和净化
5.2.1 液体食品
用滴管吸取混合均匀的试样测定（尽量避免吸取油脂层）。试样展不开时，用0.45?m微孔滤膜过滤后测定。
5.2.2 半固体食品
准确称取混合均匀的试样1g（精确至0.01g），置于15mL具塞离心管中，加2mL-3mL水，置约70℃水浴加热至溶解或分散，取出大力振摇1min-2min至均匀，静置5min-10min，吸取水层溶液（尽量避免吸取油脂层或沉淀）测定。试样展不开时，用0.45?m微孔滤膜过滤后测定。
5.2.3 固体食品及食用醋
准确称取混合均匀的试样1g（精确至0.01g），置于15mL具塞离心管中，加8mL-10mL水，大力振摇1min-2min至均匀，静置5min-10min，吸取水层溶液测定。试样展不开时，用0.45?m微孔滤膜过滤后测定。
5.3 测定步骤
用吸管缓慢滴加4-5滴待测溶液至测试卡加样孔中，静置5-10min，对结果进行判定。
5.4 质控实验
每批样品应同时进行空白试验和加标质控试验。
5.4.1 空白试验
选取已知未含吗啡、可待因成分的相应空白试样（液体、半固体或固体），按照5.2和5.3步骤与试样同法操作。
5.4.2 加标质控试验
选取已知未含吗啡、可待因成分的相应空白试样（液体、半固体或固体），按不同基质类型分别添加适量标准工作液（3.3.3），使液体试样或半固体试样中吗啡、可待因含量分别为40?g/kg，使固体试样或食用醋试样中吗啡、可待因含量分别为100?g/kg，按照5.2和5.3步骤与试样同法操作。
注：根据每次试验时所涉及到的基质类型做相应的基质加标质控试验。
6 结果判定要求
目视判定，通过对比控制线（C线）和检测线（T线）的颜色深浅进行结果判定。
6.1 无效
控制线（C线）不显色，无论检测线（T线）是否显色，均表示实验结果无效。
6.2 阳性结果
控制线（C线）显色，若检测线（T线）不出现或出现但颜色明显浅于控制线（C线），表示试样中含有待测组分且其含量高于方法检测限，判为阳性。
6.3 阴性结果
控制线（C线）显色，若检测线（T线）颜色等于或略浅于控制线（C线），表示试样中不含待测组分或其含量低于方法检测限，判为阴性。
6.4 质控试验要求
空白试验测定结果应为阴性，加标质控试验测定结果应为阳性。
7 结论
当检测结果为阳性时，应对结果进行确证。
8 性能指标
8.1 检测限
经液体调味料、火锅底料、麻辣烫底料或其他食用汤料等勾兑、调配或添加形成的液体食品：吗啡、可待因均为40?g/kg；经调味酱、调味油脂、火锅底料、麻辣烫底料、蘸料、酱油或其他半固体调味料等勾兑、调配或添加形成的半固体食品：吗啡、可待因均为40?g/kg；香辛香料、复合调味料等勾兑、调配或添加形成的固体食品以及配制醋或调味醋等食用醋：吗啡、可待因均为100?g/kg。
8.2 灵敏度：灵敏度≥99%。
8.3 特异性：特异性≥95%。
8.4 假阴性率：假阴性率≤1%。
8.5 假阳性率：假阳性率≤5%。
注：性能指标计算方法见附录A。
9 其他
本方法所述试剂、检测卡（条）信息及操作步骤及结果判定要求是为给方法使用者提供方便，在使用本方法时不做限定。方法使用者在使用替代试剂、检测卡（条）或操作步骤要求前，须对其进行考察，应满足本方法规定的各项性能指标。
本方法参比方法为上海市地方标准DB31/2010-2012《火锅食品中罂粟碱、吗啡、那可丁、可待因和蒂巴因的测定液相色谱-串联质谱法》（包括所有的修改单）。
附录A
定性方法指标计算表
表A.1性能指标计算方法
