在微生物实验室, 必须达到一定程度的无菌状态, 避免微生物污染。 假如在一个不洁的实验室或者早先打翻过样品的地方做微生物实验, 引入新的微生物污染样品的几率是很大的。
微生物的实验可以分为两大部分：前期准备和样品检验。
事实上，保持整个实验室清洁是非常重要的， 这样就不用在灭菌前担心太多了， 然而， 灭菌后必须保证样品或者培养基免受污染。其实， 可以把灭菌想像成”一扇门”， 在培养基中或者一些设备比如吸管的微生物都在灭菌过程中被杀死了，没有微生物困扰实验了。必须保证灭菌后的环境(门后的部分)的洁净， 杜绝灭菌后的培养基和设备受到污染。
无菌的重要性
无菌技术 – 高压湿热灭菌
从微生物的实验室布局角度
一个设计合理的实验室能提供一个合格的环境以支持实验能够安全有效地进行。 首先，需要为实验室选择一个合适的物理位置：
远离其他操作区域，比如，生产或者储运；
没有从其他区域进入实验室的直接入口；
实验室必须是微生物实验专用；
应有专门微生物检测无菌间，并通过缓冲间与准备间等进行区隔。
遵照GLP相关的安全规则
1.GLP要点 – 工作区域
2.GLP要点 – 洁净工作台
洁净工作台提供了控制来自环境的污染并提供工作区域的洁净空气. 洁净空气吹向工作区域, 同时, 可以避免外部空气进入工作区域
使用时, 紫外光线(或者紫外灯)应关闭, 但是使用后应打开. 如果紫外灯没有打开工作台没有开启, 工作台不能开始使用; 必须清洁工作台, 开启电源并打开紫外灯, 保持30分钟.
洁净工作台需要进行日常的确认, 一般有第三方公司进行
一个有效的实验室
应该是一个安全的实验室。 假如疏忽安全的话， 许多每天使用的培养基或者设备会产生危害。 减少这些危害带来的风险不仅仅保护了工作场所， 更重要的是， 保护了自身免于危险。
利用常识并遵照GLP相关的安全规则, 我们就能把由于微生物相关的行为带来的潜在危害降低到最小。
安全用品包含口罩, 手套和眼部防护。
口罩防止培养基和样品受到污染, 可能来自于咳嗽或者鼻涕; 根据当地的要求和习惯, 每个实验室会有不同的要求。
戴手套是为了防止培养基或者其他刺激性物质接触皮肤; 在从湿热灭菌锅内取出容器或则器皿时, 需要戴防热手套。
在配置培养基和实验中佩戴防护眼镜是一个很好的习惯, 能够购买带有屈光度的防护眼镜为佳。
当移动培养基或者样品时, 应小心注意以避免溅出或者泼出；
突然的移动会产生安全危害或者导致实验无效；
不要使用夸张的动作或者行为
同时, 不要把任何东西, 比如吸管, 放到嘴里。
实验中需要用到酒精灯或其他明火, 但是假如使用不当会带来比较高的安全危险；
确保酒精灯不用时完全关闭, 当有阀门时经常检查垫圈是否有裂痕或者泄露；
操作酒精灯时, 应确保火焰不会接触衣物或者皮肤. 可燃物品, 比如记录本, 应远离火焰以避免意外点燃；
同时, 要注意可燃液体的容器. 每次使用后应盖好盖子并远离酒精灯火焰；
使用火焰进行灭菌工作时, 可使用镊子. 把镊子放在含有95%酒精的烧杯中, 使用时, 把镊子在火焰上灼烧1-2秒, 移开镊子并等待火焰熄灭；
拿着镊子是尖端应向下, 使热的酒精不会流到手上。
湿热灭菌锅使用高压下产生的蒸汽, 温度可达1210C, 杀死了微生物, 同样可以带来人类组织的灼伤, 所以必须特别小心地操作;
如此高的温度以及蒸汽能带来极大的潜在伤害, 即使是残留的蒸汽也能带来很大的危险. 打开灭菌锅时需要特别小心, 站在边上避免面对热量和蒸汽, 缓慢的打开门, 同时, 戴好防热手套.
把需要灭菌的培养基和器皿平均放置在托盘上, 大的物品放在边上, 确保物品不会相互碰撞. 这样可以是热量均匀扩散并平衡整个托盘
在洁净台工作时必须关闭紫外灯. 紫外光线是危险的；
不要把手或者手指放在紫外灯下, 以免灼伤皮肤；
不要直接看紫外光线以免损伤眼睛。
培养基和样品: 用火焰灼烧瓶口时, 停留4-5秒, 旋转使整个表面都能被灼烧, 不要停留太久, 不要溅出样品或者培养基；
假如样品是瓶装的, 不要直接灼烧以免爆开. 可以取2个烧杯, 倒入70%酒精, 把瓶子倒置放入一个烧杯中, 使盖子和瓶颈的2.5厘米处能浸没在酒精中, 拿出瓶子用干净的布擦干; 同理, 放入第二个烧杯, 拿出瓶子直立待酒精自然蒸发；
开瓶时应特别小心不能污染样品, 可以用消毒纸巾开旋盖的瓶子; 用浸没在95%酒精并灼烧的开瓶器打开压盖瓶；
打开瓶子后, 使用相同的方法灼烧瓶口, 并确保用于消毒的酒精完全挥发；
拉罐可以使用相同的程序或者用含70%酒精的棉球擦拭顶部, 假如罐子必须用开罐器, 这个开罐器操作同开瓶器；
无菌包装的产品用含70%酒精的棉球擦拭。
微生物防护用具
1.一级防护（设备）
1.1移液辅助器，如移液器
1.2生物安全柜
1.3一次性塑料接种环、电热接种环
1.4螺口盖试管及瓶子
1.5高压灭菌器
1.6一次性塑料移液管
2.二级防护（人员）
2.1工作服、防护服
2.2手套（乳胶手套等）
2.3安全眼镜、面罩或其他防护用品
检测中常见问题解答
细菌和霉菌培养箱必须分开放置吗？
在CNAS-CL09:2013《检测和校准实验室能力认可准则在微生物检测领域的应用说明 》有此规定：5.3.3 e)检测样品中的霉菌时，要有适当的措施控制孢子在空气中的扩散。但未见到明确规定细菌培养箱和霉菌培养箱不能在同一房间的规定。一般实验室都有三种培养箱，结构设计上分为两种，一种是内部循环风温度平衡的，第二种是内外热空气流动自动平衡型的，另外第三种是热辐射温度平衡型的。有网友认为，第一种和第三种应该可以放在一个实验室，保持一定距离即可。第二种培养箱应该不能放在一个实验室。据说，CNAS现场评审，会提出细菌和霉菌培养箱分开放置要求。
