诸如此类的问题，一句话两句话还真的难以解释清楚，想解释，但难于表达，还是以文字的形式表述更清晰。
在药物分析这一块，化学药，平时接触到的绝大部分是弱酸性或弱碱性的药物。
路易斯酸碱理论，大家都懂，Herderson-Halselbalch公式也许并不陌生，本人习惯称之为“H-H公式“，表述为：
先撇开化学方面的因素，从数学方面入手，对于一个弱酸，当pH高于或低于pKa两个单位时，化合物99%以一种形式存在。
反相色谱，简言之即流动相极性大于固定相极性的色谱，对于可电离的化合物，要想获得强的反相保留，尽可能不电离，因为化合物一旦电子，极性会变大，不电离时极性最小，极性小，在反相色谱柱上保留就强。
对于HPLC分析方法开发，对反相色谱而言，化合物有保留是前提。
比如，一个弱酸性化合物，pKa为5.0，那么，当流动相（缓冲液）pH调节为3.0时，99%的化合物是以弱酸形式存在的，即HA形式，此时，化合物极性相对较小，保留较强；另一方面，对于HPLC来讲，以一种形式存在的化合物，可以获得较好的尖锐的峰。
对于为什么选择某一种缓冲体系，其实还是根据化合物本身的pKa而定。
缓冲体系，简单分，三类：
弱碱及其对应的盐，如NH3-NH4CL;
弱酸及其对应的盐，如HAc-NaAc；
多元弱酸的酸式盐及其对应的次级盐，如K2HPO3-K3PO3。
工作中，常用的缓冲盐，绝大部分为磷酸盐或醋酸盐，这就限定了流动相的组成。举例，一个弱酸性化合物，pKa为5.0，可以选择磷酸盐体系，然后用磷酸调节pH至3.0即可，大局就定了。
说了这么一大串，最关键的参数依然是pKa,这个参数在HPLC分析方法开发中有着举足轻重的地位。
