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快速提升细胞培养技巧

放大字体  缩小字体 发布日期:2018-03-24
核心提示:细胞培养条件:如何基于培养基中碳酸氢钠的浓度水平来确定最优的CO2浓度?
   1、细胞培养条件:如何基于培养基中碳酸氢钠的浓度水平来确定最优的CO2浓度?
 
  如果培养基配方中含有:
 
  NaHCO3(g/L) 浓度<1.5时,所需CO2浓度为4%;
 
  NaHCO3(g/L) 浓度处于1.5-2.2时,所需CO2浓度为5%;
 
  NaHCO3(g/L) 浓度处于2.2-3.4时,所需CO2浓度为7%;
 
  NaHCO3(g/L) >3.5时,所需CO2浓度为10%
 
  *有个例外情况。Gibco? DMEM一般遵照Dulbecco的原始配方,含有3.7g/L碳酸氢钠。用户在CO2含量为5-10%的CO2培养箱中使用此培养基已有数十年,通常可以维持生理pH值;这也与所培养的细胞类型有关。随着细胞不断生长,pH值开始不断下降(由于乳酸的代谢性积累)。
 
  2、细胞培养产品的使用:加入血清后的培养基可以使用多久?
 
  通常情况下,加入血清后的培养基可使用三个星期。尽管没有正式的研究支持数据,这是我们研究人员的经验。
 
  3、细胞培养产品的使用:存放于冰箱中的FBS为何会出现沉淀?
 
  Gibco? FBS未经预老化处理。当储存于2至8°C的条件下,血清中可能存在的各类蛋白与脂蛋白(如冷凝集素,纤维蛋白原,玻连蛋白等)会发生聚集,并且形成肉眼可见的沉淀或混浊。这并不会影响血清的使用性能。我们推荐您将FBS储存于–20°C,同时避免反复冻融。
 
  4、细胞培养出现污染:我该如何去除细胞培养基中的支原体污染?
 
  绝大部分情况下支原体污染无法从培养物中去除,只能弃用。不过也许您的培养物具有独特性,您不希望丢弃而试图去除污染。环丙沙星和Plasmocin?据报导适合此种应用。如果对相关实验方案或应用感兴趣,请联系抗生素供应商或参考已发表的文献。请注意支原体很难从培养物中清除,而且容易扩散,所以请对受污染的培养物进行隔离处理,直至支原体被完全清除,另外您的实验室可能也需要彻底净化。
 
  5、我对目前使用的培养基很满意,尽管我向其中添加了10%的FBS。我为何需要换用高级培养基(Advanced Media)?
 
  高级培养基可减少血清用量50%至90%。对于大多数细胞系而言,减少50%的血清用量不会导致任何营养问题。进一步降低血清含量可能会逐渐出现营养问题。如需将血清含量减至50%以上,则血清用量应具体视所用细胞系而定。降低血清用量的好处包括节约成本——特别是在血清价格上涨时期——延长某批血清的使用时间和减少实验条件的批次间差异。
 
  6、哪些细胞可以培养于去外泌体的FBS中,我又该使用何种FBS浓度?
 
  我们专门测试了Jurkat、MCF-7、HeLa、PC3、HEK293与A549细胞,所有这些种类的细胞都生长良好。HeLa细胞对于去外泌体FBS的存在最为敏感。您可能需要对去外泌体FBS的浓度进行调整,以匹配特定细胞系与培养系统的需要。
 
  我们推荐您以10%做为去外泌体FBS应用的起始浓度,在需要时进行上调或下调。同时,去外泌体FBS通过了单次传代后48小时的培养测试和验证。
 
  7、当我将细胞移至新培养瓶中,为何他们不贴壁?
 
  缩短胰酶消化的时间,或使用更少量的胰酶进行处理,也可换用Gibco? TrypLE? Select或Gibco? TrypLE? Express。使用2-5 mL细胞生长培养基稀释胰酶处理体系后,将细胞悬液移至15 mL离心管中。以100 x g离心5-10分钟。
 
  弃去上清液并使用2-5 mL新鲜培养基重悬细胞沉淀。确定细胞数量并按照常规方案将细胞接种入培养瓶,细胞应会正常贴壁。
 
 
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