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市售凉皮中金黄色葡萄球菌的肠毒素基因、耐药特征检测及SPA分型

放大字体  缩小字体 发布日期:2019-01-05
核心提示:凉皮是陕西地区深受人们喜爱的即食食品之一,其入口爽滑、风味独特,一年四季皆宜食用。在整个过程中,凉皮与从业人员接触频率极高,且食用前不需要进行热处理。
   凉皮是陕西地区深受人们喜爱的即食食品之一,其入口爽滑、风味独特,一年四季皆宜食用。在整个过程中,凉皮与从业人员接触频率极高,且食用前不需要进行热处理。如果相关行业标准不明确、操作管理不规范,凉皮、凉拌菜、速冻食品等食物极易被致病微生物污染,金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)便是其中之一。已有报道表明,在速冻米面制品、熟肉制品、凉拌菜等即食食品中常有金黄色葡萄球菌检出。金黄色葡萄球菌是自然界中极为常见的致病微生物之一,大约20%~30%的人口是金黄色葡萄球菌携带者。不管是发达国家还是发展中国家,由金黄色葡萄球菌引起的食物中毒在整个细菌性食物中毒中均占有较大比例。金黄色葡萄球菌引起食物中毒的主要原因是其可在食物中产生肠毒素,主要症状表现为呕吐、腹泻及腹绞痛。现已报道的金黄色葡萄球菌肠毒素种类有24 种,其中包含19 种已经动物实验证明可产生催吐作用的肠毒素(SEA、SEB、SEC、SED、SEE、SEG、SEH、SEI、SEK、SEL、SEM、SEN、SEO、SEP、SEQ、SER、SES、SET)和5 种尚待证实可产生催吐作用的肠毒素(SE1J、SE1U2、SE1V、SE1X、SE1Y)。
 
  为研究陕西特色小吃——凉皮中的金黄色葡萄球菌污染情况及其流行现状,西北农林科技大学食品科学与工程学院的王盼盼、李穗霞等人以陕西省杨凌地区为基点,选择连锁超市、学校餐厅、小餐馆、流动摊点4 种常见销售渠道,进行为期一年的定点跟踪采样。对金黄色葡萄球菌检测阳性样本中进行肠毒素基因检测、SPA分型及耐药特征分析,为该地区凉皮安全控制与监测提供科学依据和理论参考。
 
  1、金黄色葡萄球菌计数及检出率
 
  本研究凉皮样本采集时间为2015年3月—2016年3 月,针对所采集的432 份样本进行金黄色葡萄球菌的分离检测,其中105 份呈阳性,总检出率为24.3%(105/432)。对105 份阳性样本进行金黄色葡萄球菌计数,根据销售渠道、采样时间不同,选取12 个采样点每月金黄色葡萄球菌计数结果最大值进行统计分析。 凉皮中所含金黄色葡萄球菌数量分布于0.1~3.1(lg(CFU/g)),计数值最高点落于5月份从小餐馆采得的样品。计数结果中,分布于1.0~2.0(lg(CFU/g))水平的样本最多,且大都来自于流动摊点和小餐馆两种销售渠道。
 
  2、肠毒素基因检出率
 
  结果表明,105 株金黄色葡萄球菌的肠毒素基因携带率高达100%(105/105)。9 种肠毒素基因中,sea检出率最高为96.2%(101/105),see次之为64.8%(68/105),还有部分seb和sec检出,检出率分别为54.3%(57/105)和49.5%(52/105),seh检出率为1.0%(1/105),sed、seg、sei、sej的检出率则均为0.0%(0/105)。对于4 种销售渠道,连锁超市菌株主要携带sea(93.8%,12 /16)和seb(75.0%,12/16),流动摊点和小餐馆则主要携带sea(97.1%,33/34;96.2%,51/53)和see(67.6%,23/34;64.2%,34/53)。此外,这些菌株携带2 种及其以上肠毒素基因的概率较高,为90.5%(95/105)。携带3 种肠毒素基因概率相对较高为37.1%(39/105),同时携带4 种肠毒素基因的概率为19.0%(20/105),且其肠毒素基因表型为sea-seb-sec-see。
 
  3、耐药性检测结果(多重(n≥3))
 
  14 种药物中,金黄色葡萄球菌对青霉素类药品——青霉素和叶酸代谢途径抑制剂类药品——T/S均100.0%耐药,其次对氨苄西林(84.8%)和A/C(87.6%)有较高耐受率,对Ery(26.7%)和Cefox(24.8%)有一定耐受力,对Cefop、Cip、Amk和Van的耐受力最低均为0.0%。就药物类别来说,研究样本对青霉素类和四环素类药物具有较高耐受性。
 
  4、SPA型检测结果
 
  所检样本SPA型别主要以t701(81.9%,86/105)为主,其次为t441(16.2%,17/105),t127和t796占比最少(1.0%,1/105)。分析优势SPA型别t701和t441的肠毒素基因携带情况:t701主要携带sea(97.7%,84/86)和see(74.4%,64/86),sec(55.8%,48/86)和seb(46.5%,40/86)的携带率次之、t441的17 株金黄色葡萄球菌100%携带肠毒素基因sea和seb,携带see的概率为23.5%(4/17),携带sec的概率为11.8%(2/17)。此外,这2 种SPA型别对于sed、seg、seh、sei、sej的携带率则均为0.0%。
 
  讨论
 
  本研究通过对分离所得的金黄色葡萄球菌株进行检测,发现该地区所售凉皮含有的金黄色葡萄球菌携带肠毒素基因以sea(96.2%)最多,同时携带2 种及其以上肠毒素基因的概率高达90.5%,且主要以携带sea~see 5 种经典肠毒素基因为主。事实上,由金黄色葡萄球菌引起的食物中毒多数是由肠毒素SEA所引起,而本研究中的金黄色葡萄球菌可编码此蛋白的基因sea携带率又极高。研究对105 株金黄色葡萄球菌进行SPA型别检测,分析发现该地区金黄色葡萄球菌的SPA优势型别为t701(73.7%),其次还有部分t441(16.2%)。现有报道表明,分离自陕西西安地区食物中毒的金黄色葡萄球菌其SPA型别为t701。此外,t701是相关城市由金黄色葡萄球菌引起食物中毒的2 种SPA型别之一(另一种为t189)。分析本研究中86 株t701金黄色葡萄球菌的sea~sei 9 种肠毒素基因携带情况:sea携带率最高为97.7%,see次之为74.4%,sec和seb相对较高分别为55.8%和46.5%,其余均为0.0%。
 
  本研究针对杨凌4 种销售渠道进行定点跟踪检测,结果发现105 株金黄色葡萄球菌株的肠毒素基因、SPA分型结果具有较高稳定性,具体表现在spa-t701及肠毒素基因sea、see的高检出率。分析原因,其一是该种SPA型别可长期且较稳定存在于陕西杨凌区凉皮食品中;其二是本研究选择长期定点的采样方式,所获得样本的检测结果在一定程度上具有重复性;其三是陕西杨凌区覆盖面积有限,检测结果呈现相对稳定性。
 
 
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