中国农业科学院郑州果树研究所的李佳秀、张春岭、焦中高*等人采用HPLC法对不同品种的42 个甜樱桃果汁的有机酸组成进行分析，构建甜樱桃果汁有机酸的HPLC指纹图谱，并通过相似度评价、主成分分析和聚类分析，对模拟在甜樱桃果汁中添加低价果汁（梨汁、苹果汁、杏汁和桃汁）和外源柠檬酸等掺假方式进行鉴别，以期为甜樱桃果汁的掺假鉴定和质量控制提供参考。
1、指纹图谱方法学考察结果
同一样品在24 h内的6 次测定结果中，各共有峰保留时间和峰面积的RSD分别为0.05%～0.99%和0.37%～3.93%，说明该方法在24 h内稳定性良好。同时，重复性实验结果显示，各共有峰保留时间和峰面积的RSD分别为0.03%～0.14%和0.82%～2.82%，表明该方法具有较好的重复性。
2、指纹图谱共有模式的建立及相似度评价
指纹图谱共有模式的建立及共有峰的标定
将草酸、酒石酸、奎宁酸、苹果酸、莽草酸、乳酸、柠檬酸、富马酸及其混合标准品依次进样，根据保留时间将标准品溶液的色谱图与样品色谱图进行对比，共指认出了4 个共有峰，其中3号峰为苹果酸，4号峰为莽草酸，8号峰为柠檬酸，9号峰为富马酸。
共有峰的相对保留时间和相对峰面积
可以看出，42 个甜樱桃果汁样品的共有峰的相对峰面积差别较大，10 个共有峰的RSD在18.99%～64.97%之间，这说明42 个甜樱桃果汁的主要特征成分含量差别较大，不同品种、不同时间采摘的樱桃果汁的指纹图谱存在一定的差异。
相似度评价与阈值的确定
所有甜樱桃果汁的相似度都很高，42 个样品的指纹图谱与对照图谱之间的相似度均在0.948以上。不同品种、不同采摘时间的甜樱桃，其果汁有机酸HPLC指纹图谱的相似度差异并不明显。说明本研究建立的樱桃汁对照指纹图谱和标定的10 个共有峰可以反映甜樱桃果汁的有机酸指纹特征，具有鉴定评价意义。
3、掺假样品的鉴别
随着低价果汁和柠檬酸掺加量的增加，掺假样品的指纹图谱与甜樱桃果汁对照指纹图谱的相似度降低。当梨汁与苹果汁的掺加量达到60%，杏汁的掺加量达到40%时，掺假样品与对照指纹图谱的相似度低于甜樱桃果汁的相似度阈值0.948，此时掺假样品与甜樱桃果汁可以区分开。当桃汁掺加量为100%，即完全由桃汁代替甜樱桃果汁时，才能鉴别出伪品。
4、主成分分析
根据特征值大于1提取主成分，共提取了3 个主成分，3 个主成分的累计方差贡献率为73.72%，基本可以反映大部分色谱峰数据所具有的信息。所有甜樱桃果汁的得分比较接近，在主成分分析得分图中聚在一起，添加柠檬酸的所有5 个伪品均远离甜樱桃果汁，说明通过主成分分析可以准确地识别掺假柠檬酸的甜樱桃果汁。掺假梨汁、苹果汁、杏汁、桃汁的伪品随着掺加量的增加，在得分图中的分布也越来越远，从而实现区分和鉴别。
5、聚类分析
可以看出，当欧氏距离为0.55时，所有果汁样品聚为5 类，此时42 个甜樱桃果汁样品可以与25 种掺假样品全部区分开。其中，全部甜樱桃果汁样品和掺假柠檬酸的5 种伪品分别单独聚为一类，掺假杏汁和桃汁的10 种伪品聚为一类，掺加20%苹果汁的伪品（PW1）单独为一类，其余9 种伪品聚为一类。
结 论
本研究根据甜樱桃果汁有机酸的HPLC分析方法，利用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统（V2.0）”软件，建立了甜樱桃果汁HPLC指纹图谱。相似度评价结果表明，42 个甜樱桃果汁的有机酸指纹图谱与对照指纹图谱的相似度均在0.948以上，不同品种、不同采收时间的甜樱桃果汁的指纹图谱具有很好的一致性。甜樱桃果汁中添加其他果汁或柠檬酸可导致相似度降低，而且掺假量越大，其指纹图谱与对照指纹图谱之间的差异越大，但掺假量较小的样品仅用相似度评价不能从甜樱桃果汁中分辨出来。应用甜樱桃果汁有机酸的HPLC指纹图谱结合主成分分析和聚类分析等模式识别方法，可以实现对甜樱桃果汁和所有掺假低价果汁（梨汁、苹果汁、杏汁和桃汁）和外源柠檬酸样品的区分，而且掺假量越大，区分效果越好。因此，有机酸HPLC指纹图谱结合化学计量学分析，可用于甜樱桃果汁掺假鉴定和质量控制。
