流动相溶剂的选择
流动相溶剂的选择
1.所选用的流动相溶剂要有一定的化学稳定性，不与固定相和样品组分起反应，其纯度和化学特性必须满足色谱过程的稳定性和重复性的要求。
2.溶剂应当不干扰检测器的工作，溶剂应与检测器匹配，选择不影响检测器正常工作应选择在测定波长范围内无吸收的流动相。
3.在制备分离中, 溶剂应当易于除去, 不干扰对分离组分的回收。
4.溶剂的粘度要小，保证合适的柱压降。
5.从实用角度考虑，溶剂应当价格低廉，容易购得，使用安全，纯度要高。
秘诀1由强到弱：
一般先用90%的乙腈(或甲醇)/水(或缓冲溶液)进行试验，这样可以很快地得到分离结果，然后根据出峰情况调整有机溶剂(乙腈或甲醇)的比例。
秘诀2三倍规则：
每减少10%的有机溶剂(甲醇或乙腈)的量，保留因子约增加3倍，此为三倍规则。这是一个聪明而又省力的办法。调整的过程中，注意观察各个峰的分离情况。
秘诀3粗调转微调：
当分离达到一定程度，应将有机溶剂10%的改变量调整为5%，并据此规则逐渐降低调整率，直至各组分的分离情况不再改变。
流动相的配制要点要记得
1.配制不含水的有机溶剂类流动相所用量筒应区分开，必须是干燥的，不得有水。
2.流动相的抽滤。含水流动相和不含水流动相的抽滤装置应区分开。抽滤不含水的有机溶剂类流动相所用装置必须是干燥的，不得有水。
3.超声波震荡，除气泡。
4.使用0.04%的叠氮钠溶液以防止流动相长菌。
流动相的储存及标识
将适量抽滤好的流动相倒入流动相专用储液瓶，润洗一次后倒入废液瓶，再将剩余流动相全部倒入专用储液瓶；填写《流动相标签》，并将标签贴在储液瓶上。更换流动相时应及时更新《流动相标签》。
流动相效期
例如：纯甲醇使用日期是2015年06月11日，有效期至2015年09月10日；甲醇与缓冲盐混合溶液配制日期是2015年03月10日，有效期至2015年03月16日。
不可忽略的步骤
加盐流动相做完实验冲洗步骤：
先用50%纯水和50%有机相冲洗，然后逐渐将有机相将低到10%甚至5%，最后用100%有机相冲洗封柱，整个过程1h以上。若是冲洗一晚上，则用5%甲醇以0.1ml/min以下的低流速冲洗。
10%异丙醇在线冲洗密封垫：
10%异丙醇需定期更换，流动相不加盐时，周期可以设置1min，冲洗0.2min；流动相加盐时，周期设置1min，冲洗0.5min，最大为0.7min（长期处于最大值会导致蠕动泵磨损）。
流动相更换：
流动相瓶必须清洗干净，含水流动相需定期更换避免长菌，纯水2天换一次，进样前和实验过程中需不定时观察流动相有无沉淀。
流动相瓶清洗：
先用酸液浸泡，然后用大量的自来水冲洗，接着用蒸馏水涮3次以上，最后一次用哇哈哈水润洗。
关于流动相所用试剂
溶剂中的杂质会导致出现“鬼峰”，特别是梯度解吸时。
溶剂混合产生的问题：
样品的溶解：
流动相过滤头产生的问题
缓冲液的使用：
使用前必须过滤;
使用后一定要进行清洗 ，以免造成腐蚀、磨损、阻塞:用纯水冲洗30-60min（1ml/min），再用甲醇冲洗30min;
易受到细菌和霉菌的影响。
注意：不能直接用有机溶剂冲洗。
流动相脱气的必要性
更换流动相时的注意事项
更换互溶流动相时注意清洗吸滤头；
更换不互溶流动相时必须用中间过渡液清洗系统，例如异丙醇；
更换缓冲液时，应用纯水过渡；
更换流动相后应使用PURGE键快速排液。排去残液或气泡。
注意缓冲液的pH值与使用的色谱柱匹配
缓冲液必须过滤膜；
使用缓冲液期间，用注射器推纯水，清洗柱塞杆，延长泵密封垫寿命；
分析完后用纯水清洗系统。
自动进样器清洗液
如选择不当重现性不好；
常用1：1的甲醇水或不含盐的流动相；
清洗液必须过滤，经常更换；
清洗液需对样品有一定的溶解度；
不可用乙腈作为自动进样器的清洗液。
关于流动相的维护：
1、如果不是做梯度洗脱，必须将有机相和水相分别配置的话。尽可能用混合好的流动相，而不是用靠仪器混合。尤其是水相为磷酸盐溶液的时候，磷酸盐溶液可是细菌的“培养基”哦，在夏天基本上1个晚上过来，里面就有肉眼可见菌团了。
2、如果非得用纯的水相作为流动相（通常是做梯度的时候），那么注意务：必每天做完实验后将水相的管路用纯水冲洗干净，用有机相保存（如果水相不含盐，直接用有机溶剂替换即可）。
3、如果有可能，请用煮沸过的水制备水相。
4、即使是混合好的流动相，如果水相含盐，有机相比例不高，那么也需要定期检查，尤其是在夏天的时候。
