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凝胶层析如何防止微生物污染

放大字体  缩小字体 发布日期:2019-05-07
核心提示:交联葡聚糖和琼脂糖都是多糖类物质,防止微生物的生长,在凝胶层析中十分重要
   防止微生物的污染
 
  交联葡聚糖和琼脂糖都是多糖类物质,防止微生物的生长,在凝胶层析中十分重要,常用的抑菌剂有:
 
  ⑴叠氨钠(NaN3)在凝胶层析中只要用0.02%叠氮钠已足够防止微生物的生长,叠氮钠易溶于水,且它不与蛋白质或碳水化合物相互作用,因此叠氮钠不影响抗体活力,不会改变蛋白质和碳水化合物的层析特性。但叠氮钠可干扰荧光标记蛋白质。
 
  ⑵可乐酮[Cl3C-C(OH)(CH3)2]在凝胶层析中使用浓度为0.01-0.02%。在微酸性溶液中它的杀菌效果最佳,在强碱性溶液中或温度高于60℃时易引起分解而失效。
 
  ⑶乙基汞代巯基水杨酸钠 在凝胶层析中作为抑菌剂使用浓度为0.05-0. 01%。在微酸性溶液中最为有效。重金属离子可使乙基代巯基的物质结合,因而包含疏基的蛋白质可在不同程度上降低它的抑菌效果。
 
  ⑷苯基汞代盐 在凝胶层析中使用浓度为0.001-0.01%。在微碱性溶液中抑效果最佳,长时间放置时可与卤素、硝酸根离子作用而产生沉淀;还原剂可引起此化合物分解;含疏基的物质亦可降低或抑制它的抑菌作用。
 
  凝胶色谱柱(水性)的保养与保存:凝胶色谱柱需要注意防止微生物的生长,被微生物污染后的色谱柱将无法重现原来的分离效果与柱效,严重会使凝胶色谱柱报废。为了抑制微生物的生长,可以使用低温保存。值得注意的是温度不能过低,以免冻结,为了不冻结可以提高保存时介质的离子强度。常用的保存抑菌剂有:0.02%叠氮钠、0.002%洗必泰(hibitane,双氯苯双胍己烷)、0.01%-0.02%三氯丁醇、0.1mol/l氢氧化钠。也可以用一定量有机溶剂来保存,如20%乙醇。值得注意的是,无论何种保护方式,都必须根据色谱柱的特点来进行。
 
 
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