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PCR出现非特异性扩增带或者涂抹带怎么办

放大字体  缩小字体 发布日期:2019-07-02
核心提示:PCR出现非特异性扩增带或者涂抹带怎么办
   出现非特异性扩增带
 
  pcr扩增后出现的条带与预计的大小不一致,或大或小,或者同时出现特异性扩增带 与非特异性扩增带。非特异性条带的出现。
 
  主要有三点原因:
 
  一是引物与靶序列不完全互补、 或引物聚合形成二聚体。
 
  二是mg2+离子浓度过高、退火温度过低,及pcr循环次数 过多有关。
 
  三是酶的质和量,往往一些来源的酶易出现非特异条带而另一来源的酶 则不出现,酶量过多有时也会出现非特异性扩增。
 
  其对策有:必要时重新设计引物。
 
  减低酶量或调换另一来源的酶。降低引物量,适当增加模板量,减少循环次 数。
 
  适当提高退火温度或采用二温度点法(93℃变性,65℃左右退火与延伸)。
 
  出现片状拖带或涂抹带
 
  pcr扩增有时出现涂抹带或片状带或地毯样带。
 
  其原因往往由于酶量过多或酶的质量差,
 
  dntp浓度过高,
 
  mg2+浓度过高,
 
  退火温度过低,
 
  循环次数过多引起。
 
  其对策有:
 
  减少酶量,或调换另一来源的酶。
 
  减少dntp的浓度。
 
  适当降低mg2+浓 度。
 
  增加模板量,
 
  减少循环次数。
 
 
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