来自青岛农业大学食品科学与工程学院的胡欣蕾、李文香和青岛农业大学生命科学学院的田雪梅等人以花脸香蘑菌丝体为实验材料，通过正交试验对多糖提取条件进行优化；通过花脸香蘑菌丝体多糖对小鼠巨噬细胞Ana-1存活率、细胞因子TNF-α和IL-6分泌量、中性红吞噬能力以及膜表面蛋白Toll样受体（TLR）TLR2和TLR4表达量能力的影响来研究其免疫活性，以期为花脸香蘑多糖获得途径以及功能性食品或药物的研发提供理论依据。
1葡萄糖含量测定标准曲线结果
总糖含量测定标准曲线所建立的回归方程为y=0.0124x＋0.0103，R2=0.9991。还原糖标准曲线所建立的回归方程为y=0.0283x－0.0164，R2=0.9998。
2浸提温度、浸提时间、液料比对多糖提取率的影响
浸提温度：液料比为40∶1（mL/g），浸提3 h，浸提温度在45～85 ℃范围内，随温度的升高花脸香蘑菌丝体多糖提取率呈先上升后下降的趋势，当温度为65 ℃时提取率最大，当温度高于65 ℃时提取率逐渐下降。所以提取的最佳温度应该在65 ℃左右。
浸提时间：在液料比40∶1（mL/g）、浸提温度65 ℃条件下，随浸提时间的延长提取率增加。当浸提时间为2.5 h时，提取率最大；当浸提时间大于2.5 h，提取率几乎保持不变。
液料比：在65 ℃温度条件下浸提3 h，随着液料比的增大，多糖提取率逐渐呈现先增后降的变化趋势。在液料比小于40∶1时，多糖提取率随着液料比的增加而呈上升趋势；当液料比为40∶1时，提取率达到最大；当液料比大于40∶1以后，多糖提取率随液料比的增大而下降。所以提取的最佳液料比为40∶1（mL/g）。
3正交试验结果
在试验范围内各因素对花脸香蘑菌丝体多糖提取率的影响程度依次为浸提温度＞液料比＞浸提时间，由k值大小可知，优化工艺最佳组合为浸提温度65 ℃、浸提时间2.5 h、液料比40∶1（mL/g），多糖提取率最高可达15.79%。由正交试验方差结果分析可知，浸提温度、浸提时间、液料比对提取率的影响极显着。
4花脸香蘑菌丝体多糖对Ana-1存活率的影响
当花脸香蘑菌丝体多糖质量浓度小于0.8 mg/mL时，对Ana-1细胞存活率影响不显着（P＞0.05），当多糖质量浓度大于等于0.8 mg/mL时，对Ana-1细胞存活率影响显着（P＜0.05），细胞存活率随多糖质量浓度的增大而增加。当花脸香蘑菌丝体多糖质量浓度为1.6 mg/mL时，Ana-1细胞的存活率为145.14%。
5花脸香蘑菌丝体多糖对Ana-1分泌细胞因子TNF-α、IL-6的影响
Ana-1细胞加入花脸香蘑菌丝体多糖溶液后细胞因子TNF-α分泌量随多糖质量浓度的增大而增加。当多糖质量浓度为1.6 mg/mL时，细胞上清液中TNF-α的质量浓度达到了885.25 ng/mL，与未添加组相比提高了192.40%（P＜0.05）。并且花脸香蘑菌丝体多糖质量浓度在0.05～0.8 mg/mL有效剂量范围内细胞因子IL-6分泌量呈明显的上升趋势，当多糖质量浓度大于0.8 mg/mL时，IL-6分泌量上升速度缓慢。当多糖质量浓度为0.8 mg/mL时，细胞上清液中IL-6的质量浓度达到133.87 ng/mL，与未添加组相比提高了214.99%（P＜0.05）。结果表明，花脸香蘑菌丝体多糖对Ana-1分泌细胞因子TNF-α和IL-6有良好的促进作用。
6花脸香蘑菌丝体多糖对Ana-1细胞中性红吞噬能力的影响
当花脸香蘑多糖质量浓度高于0.2 mg/mL时，小鼠巨噬细胞Ana-1吞噬中性红能力显着提高（P＜0.05），呈明显的量效关系。当花脸香蘑多糖质量浓度为1.6 mg/mL时， Ana-1吞噬中性红能力提高了38.1%。结果表明，花脸香蘑多糖对Ana-1吞噬中性红能力有一定的促进作用。
7花脸香蘑多糖对Ana-1细胞膜蛋白表达的影响
随花脸香蘑菌丝体多糖质量浓度的增加，细胞膜蛋白TLR2表达量显着增加（P＜0.05）。当多糖质量浓度为1.6 mg/mL时，TLR2表达量最高为21.79 ng/mL。并且随花脸香蘑菌丝体多糖质量浓度的增加，细胞膜蛋白TLR4表达量也显着增加（P＜0.05），升高趋势与TLR2的变化相同。当多糖质量浓度为1.6 mg/mL时，TLR4表达量最高为16.245 ng/mL。表明花脸香蘑菌丝体多糖对Ana-1细胞膜蛋白Toll样受体TLR2和TLR4表达有良好的促进作用。
结 论
花脸香蘑菌丝体多糖最佳提取条件为浸提温度65 ℃、浸提时间2.5 h、液料比40∶1（mL/g），提取率最高为15.88%；在0.05～1.6 mg/mL的有效剂量范围内，花脸香蘑菌丝体多糖能够不同程度地促进小鼠巨噬细胞Ana-1的增殖，提高细胞因子TNF-α和IL-6分泌量，增强中性红吞噬能力、膜表面蛋白TLR2和TLR4表达量能力，其中以1.6 mg/mL效果最佳。表明花脸香蘑菌丝体多糖具有优良的免疫活性。
