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北沙参多糖铁配合物的制备、结构特征及生物活性

放大字体  缩小字体 发布日期:2019-01-31
核心提示:随着多糖研究的深入,多糖的多种生物活性逐渐被发现,其不仅具有多方面的药理作用,而且来源广泛,毒副作用低,是一种理想的药品和保健食品开发来源。
   随着多糖研究的深入,多糖的多种生物活性逐渐被发现,其不仅具有多方面的药理作用,而且来源广泛,毒副作用低,是一种理想的药品和保健食品开发来源。近年来国内外学者利用多糖与铁配合生成多糖铁配合物,这类有机配合物对胃肠道刺激小、生物利用度高,并且当配合物中的铁脱离配体多糖后,多糖的多种生物活性在体内也可发挥功效。
 
  因此,河北科技大学化学与制药工程学院的景永帅、张瑞娟、张丹参*等人采用三氯化铁共热合成法对北沙参多糖进行结构修饰,得到北沙参多糖铁配合物,并对其理化性质、结构特征和生物活性进行表征和分析,为北沙参多糖铁配合物作为补铁剂提供理论依据。
 
  1、北沙参多糖的提取率和单糖组成分析
 
  北沙参经乙醇除脂、水提醇沉法制备后,得到北沙参多糖为4.6 g,提取率为18.4%。北沙参多糖经完全酸水解后,用HPAEC-PAD分析,与标准单糖的高效阴离子交换色谱保留时间和峰面积对照,结果表明:北沙参多糖由葡萄糖和甘露糖组成,其物质的量比为1.00∶4.25。
 
  2、北沙参多糖及其铁配合物的理化性质和结构特征
 
  多糖铁配合物中铁含量测定
 
  根据标准曲线得到标准曲线方程:y=0.150 7x+0.005 2,R2=0.996 8,其中y为吸光度,x为Fe2+质量浓度。由标准曲线方程计算铁含量,北沙参多糖铁配合物中铁质量分数为19.31%。
 
  紫外-可见光谱图谱分析
 
  北沙参多糖在260 nm和280 nm波长处无吸收峰出现,说明样品中不含有核酸和蛋白质。在紫外区,多糖铁配合物的吸收强度明显比北沙参多糖的吸收强度强,推测可能为铁离子与多糖中的羟基发生了络合反应。
 
  红外光谱分析
 
  修饰前后的红外图谱主要特征吸收峰未发生显着改变,说明铁配合物修饰未破坏其基本结构。3 400 cm-1附近为多糖分子中羟基的伸缩振动吸收峰,修饰后,峰形发生变化,可能因多糖的羟基参与了络合反应,这与紫外-可见光谱分析结果相一致;1 600 cm-1左右为C=O的伸缩振动吸收峰,修饰后吸收峰减弱,可能是多糖的C=O与铁离子配位造成的;1 250~1 000 cm-1范围内是C—O的伸缩振动吸收,修饰后吸收峰减弱,推测可能是C—O键参与了多糖与铁的络合,或是因为氢键之间的相互作用;680 cm-1和850 cm-1附近的吸收峰增强。
 
  透射电镜分析
 
  黑色斑点是铁核,外围电子透明的亮区即北沙参多糖,铁核在多糖中分布较分散,大小不一,还比较规则,直径在100~200 nm范围。
 
  热重分析结果
 
  01
 
  北沙参多糖热重分析
 
  图谱主要特征为有1 个吸热峰1 个放热峰,53 ℃的吸热峰是由多糖中的吸附水升华引起的,300.84 ℃为多糖分解的放热峰。由TGA曲线(实线)可知,北沙参多糖的热分解曲线分为两个阶段,第1个阶段为27~160 ℃,此阶段失去的主要是水,质量损失率为7.399%;第2个阶段为160~800 ℃,在270~350 ℃区间,多糖快速质量损失,在350~800 ℃质量损失速度减慢,此阶段的质量损失率为66.7%,说明在该温度区域,多糖发生了分解,化学键受到了破坏。
 
  02
 
  多糖铁配合物热重分析图
 
  多糖铁配合物主要特征为有2 个吸热峰1 个放热峰,55 ℃的吸热峰可能是因为多糖铁复合物中的吸附水升华引起的,288.58 ℃有一个放热峰,596.99 ℃有一个小的吸热峰。由TGA曲线(实线)可知,多糖铁配合物的热分解曲线分为3 个阶段,第1个阶段是32~150 ℃,此阶段失去的主要是水,质量损失率为10.65%;第2个阶段是150~550 ℃,此阶段质量损失率为41.45%,说明在该温度区域,多糖发生了分解,化学键受到了破坏;第3个阶段是550~800 ℃,质量损失率为11.78%。
 
  3、北沙参多糖及其铁配合物的生物活性
 
  清除羟自由基作用
 
  北沙参多糖及其铁配合物对羟自由基均有一定的清除作用,样品质量浓度不同,对羟自由基的清除作用也不同,整体呈线性关系。北沙参多糖的IC50值为6.413 mg/mL,多糖铁配合物的IC50值为0.057 mg/mL,VC的IC50值为0.047 mg/mL,IC50值越小,清除作用越好。
 
  对α-葡萄糖苷酶的抑制活性
 
  随着样品质量浓度的升高,北沙参多糖和多糖铁配合物对α-葡萄糖苷酶的抑制作用也逐渐增强,呈现质量浓度依赖性。当质量浓度为4 mg/mL时,北沙参多糖及其铁配合物对α-葡萄糖苷酶的抑制率分别为23.6%和69.35%,铁修饰后,抑制率明显增强,但均低于阳性对照阿卡波糖对α-葡萄糖苷酶的抑制率。
 
  结 论
 
  选用北沙参为原料,采用水提醇沉法制备北沙参多糖。对制备的多糖进行铁配合物修饰。采用紫外-可见光谱、红外光谱、HPAEC-PAD、透射电镜、DSC和TGA等对多糖及其铁配合物的理化性质和结构特征等进行评价,从清除羟自由基和对α-葡萄糖苷酶的抑制活性两个方面进行生物活性测试,得出以下结论:1)北沙参多糖的提取率为18.4%,是由葡萄糖和甘露糖组成,其物质的量比为1.00∶4.25,不含有核酸和蛋白质。2)多糖铁配合物中铁离子质量分数为19.31%,是以聚合的β-FeOOH微核为核心,多糖在其表面配合形成的多糖铁(Fe3+)表面配合物。3)北沙参多糖经铁修饰后,对羟自由基清除作用和对α-葡萄糖苷酶的抑制能力均得到明显提高。北沙参多糖铁配合物具有较好的稳定性和生物活性,有望开发成为一种具有多重保健功能的生物多糖型补铁剂。
 
 
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