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DNA合成仪的合成原理及过程

放大字体  缩小字体 发布日期:2019-06-20
核心提示:2019年06月19日 14:41人气:18 【仪器网 产品文库】设计用于合成结构上类似DNA或RNA的寡核苷酸的自动化仪器。一般应用于固相合成法,每次将一......
   【仪器网 产品文库】DNA合成仪设计用于合成结构上类似DNA或RNA的寡核苷酸的自动化仪器。一般应用于固相合成法,每次将一个核苷酸加到所接长的寡核苷酸链上,加入每一个核苷酸都利用相同的化学反应与相应的嘌呤或嘧啶碱基衍生物作用。所用化学反应和操作细节随不同的仪器而改变,广泛应用的方法是DNA合成的磷酸酰胺法。
 
  合成原理:
 
  DNA的固相合成:即DNA3'端固定于基质上,然后沿3'向5'方向依次添加核苷酸直至合成所需的DNA片段。不同于应用DNA聚合酶的DNA合成。
 
  合成过程:
 
  di一个碱基的3‘末端固定在树脂上,下一个碱基的5’-OH用二对甲氧三苯甲基DMT保护,碱基上的氨基用苯甲酸保护,然后对3‘-OH用氨基磷酸化合物进行活化。
 
  1.1个碱基的5’-OH和下个碱基的3‘-OH形成亚磷酸三酯,
 
  2.然后用dian氧化成磷酸三酯
 
  3.加入二lv乙酸除去第二个碱基5’-OH上的保护剂DMT
 
  循环进行加入下一个碱基合成完毕后
 
  1.用苯硫酚除去5’-OH上的保护剂DMT
 
  2.用浓氢氧化铵将片段与固体树脂断开,洗脱
 
  3.用浓氢氧化铵在加热的条件下除去碱基上的保护剂
 
  4.除去氢氧化铵,真空抽干
 
  5.液相色谱或者PAGE,回收片段最长的。
 
 
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