实验室从深绿木霉XS6的发酵液中提取到了一种深绿木霉阿魏酸酯酶（Trichoderma atroatroviride feruloyl esterase，TaFAE）。该酶的酸碱稳定性强、酸性环境下活性高，在食品和饲料行业应用前景广阔。徐州工程学院食品（生物）工程学院的高兆建、许 祥、王先凤等人是从保藏菌株中分离出阿魏酸酯酶，并研究其酶学性质。本实验旨在为后续研究提供理论基础，扩大阿魏酸酯酶在生产实践中的应用。
1、TaFAE的分离纯化
将经过(NH4)2SO4盐析、透析6?h除盐后的粗酶液上样。DEAE-Cellulose DE52弱阴离子交换柱，缓冲溶液充分洗脱，去除未结合的杂蛋白，然后改用线性NaCl浓度对蛋白进行梯度洗脱，得到多个较大洗脱峰。将收集管进行酶活性检测，活性主要分布在40～52号收集管，对应NaCl洗脱浓度0.5～0.7?mol/L。
2、TaFAE纯度和分子质量的测定
只经过(NH4)2SO4盐析后的酶液有许多条蛋白条带，说明杂蛋白含量多；再经过离子交换层析后得到的条带明显减少，共9 条带，蛋白质得到了较好的纯化；最后经过凝胶过滤层析后只得到1 条带，说明得到了纯的TaFAE。根据标准蛋白的标准曲线方程计算出TaFAE的分子质量为66.4?kDa。
3、温度对TaFAE活性的影响
TaFAE的最适反应温度为40 ℃，在30～45 ℃范围内TaFAE均能保持90%以上的活性，当温度超过50 ℃时酶活性下降较快。
4、pH值对TaFAE活性及稳定性的影响
TaFAE活性在pH 3.0～7.0内略有起伏但均能保持80%以上，最适pH值在4.0。pH值大于7.0时酶活性急剧下降，在pH?8.0，酶活性骤降至40%，pH值为11.0时酶几乎失活。这说明碱性条件不利于TaFAE的催化降解反应，而中酸性条件酶活性都非常高。
5、金属离子及化学试剂对TaFAE活性的影响
SDS对酶活性具有明显的促进作用，相对酶活性达到115%；β-巯基乙醇仅次于SDS，相对酶活性达到了112%；另外，二硫苏糖醇和Trition X-100对酶活性也具有促进作用。说明硫醇基团对酶的稳定性有促进作用。
6、TaFAE底物特异性及动力学分析
TaFAE对阿魏酸甲酯的亲和性最高，芥子酸甲酯次之，对对羟基肉桂酸甲酯亲和性最小，对咖啡酸甲酯无活性。从最大酶促反应速率来看，以芥子酸甲酯为底物时反应速率最大，为32.21?μmol/（min·mg），约是阿魏酸甲酯的2 倍，阿魏酸乙酯的3.3倍，对羟基肉桂酸甲酯的23 倍。
7、TaFAE作用于脱淀粉麸皮释放阿魏酸的功能
随着酶解时间的延长，TaFAE和木聚糖酶共同作用产生阿魏酸的量是TaFAE单独水解麸皮产生阿魏酸的2 倍以上，这说明，TaFAE和木聚糖酶在水解麸皮释放阿魏酸上具有良好的协同作用，能够促进阿魏酸的生成。
结论
结 论
本研究从野生菌株深绿木霉XS6中纯化出阿魏酸酯酶，与基因工程菌株重组得到的阿魏酸酯酶相比更易为消费者所接受。通过对TaFAE酶学特性研究发现，与以往文献报道的阿魏酸酯酶有较大区别，在多方面有创新特性。TaFAE的突出特点是能够在非常酸的环境下保持高稳定性和活性，为特定环境下的酶的需求提供了更好的来源。另外，TaFAE在较高的温度下保持了较好的稳定性，60 ℃维持80?min，相对活性在75%以上。在金属离子、表面活性剂、还原剂等作用下以及底物降解特异性等方面TaFAE也表现出了优良的酶学特性。因此，本研究的TaFAE有潜力在食品、饲料、生物燃料、纺织、造纸、医药等领域广泛应用。
