选用 3 种常用蛋白质原料，即豆粕(CP%=49.3%)、菜粕(CP%=40.9%)和鱼粉(CP%=67.2%)。为了模拟饲料在猪体内的消化过程，参照 Huang 等体外两步酶解法对蛋白质原料进行消化处理。每瓶原料含氮量为 100 mg，每种原料 16 瓶，各加入 9 mL 蒸馏水振荡混匀，依次添加 α-淀粉酶(Sigma 公司)、胃蛋白酶(Solarbio 公司)、胰蛋白酶(Solarbio 公司)和糜蛋白酶(Solarbio 公司)模拟胃、小肠两阶段消化。将消化液转移到透析袋置于 0.01 mol/L 氯化钠溶液，37 °C 透析 15 h；后更换透析液，继续透析 2 h。最后用尼龙网过滤收集每种原料的全部酶解液，用于配制培养基。
参照 Dai 等方法配制厌氧培养基。加入过量葡萄糖(10 mg/L)，氮源为唯一变量条件，含氮培养基添加制备的全部消化滤液，调节培养基pH为6.8。厌氧条件下分装 83 mL 至血清瓶，含氮培养基每瓶含氮量为 100 mg，115 °C 灭菌 15 min。
收集 4 头(杜×长×大)商品猪(饲喂玉米-豆粕日粮)的新鲜十二指肠、空肠中段和回肠中段食糜，根据马梅蕾等方法制备接种物，厌氧条件下用 37 °C 无氮培养基稀释食糜，培养基与食糜的稀释比例分别为十二指肠 3:1 (V/W)、空肠和回肠 9∶1 (V/W)。将混合液经 4 层无菌纱布过滤至血清瓶，静置培养 4 h。然后分别取接种物 5 mL，接种至上述培养基中，发酵体系为 90 mL，静置培养 12 h。
试验包括 S (Soybean meal，豆粕组)、R (Rapeseed meal，菜粕组)、F (Fish meal，鱼粉)和 N (No nitrogen，无氮组) 4 种培养基，分别接种由十二指肠、空肠或回肠食糜制备的接种物，共 12 组，每组 4 个重复。接种后将发酵瓶置于 37 °C 条件下持续培养 12 h。
分别于 0、4、8、12 h 采集培养液样品各 5 mL，参照马艳艳等方法用 pH-HJ90B 酸度计测定 pH；参照 Weatherburn 等方法测定氨氮浓度；参照 Makkar 等方法测定菌体蛋白含量；参照 Mao 等方法用气相色谱仪(Shimadzu，GC-14B，Japan) 测定乙酸、丙酸和丁酸浓度；参照 Yang 等方法用酚/氯仿/异戊醇抽提若干次获得发酵液总 DNA，参照 Yang 等方法测定总细菌、拟杆菌门、厚壁菌门和乳酸杆菌数量。
试验数据经 Excel 2013 初步处理后，利用 SPSS 17.0 进行单因素方差分析，差异显着性采用 LSD-Turkey 法进行多重比较，P<0.05 时为差异显着。
