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病毒组研究的主要方法和策略

放大字体  缩小字体 发布日期:2018-05-04
核心提示:目前,病毒组研究仍然面临着很多挑战。首先,由于病毒的极端多样性,病毒之间不存在类似于细菌16S rRNA基因的保守序列,且不同病毒序列之间序列差异性极大。其次,缺少病毒参考数据库,最新的NCBI数据库中,收录的具有全长病毒基因组序列仅有7011株(2017/02/01)。
   目前,病毒组研究仍然面临着很多挑战。首先,由于病毒的极端多样性,病毒之间不存在类似于细菌16S rRNA基因的保守序列,且不同病毒序列之间序列差异性极大。其次,缺少病毒参考数据库,最新的NCBI数据库中,收录的具有全长病毒基因组序列仅有7011株(2017/02/01)。
 
  再者,在微生物组的宏基因组测序中,来自病毒基因组的DNA在微生物群落的总DNA中所占比例非常小,这是因为大多数病毒的基因组太小,尤其是其在低水平存在的情况下很难获得。病毒宏基因组学是一种新兴的病毒组学研究技术,它突破了传统技术方法的局限,而直接以环境中所有病毒的遗传物质为研究对象,可以快速地鉴定出环境中所有的病毒组成,从而是一种发现新病毒、监控病毒变异的分子流行病毒学研究的有力手段。
 
  目前,病毒宏基因组学的研究已经鉴定出了许多新型病毒,并显示了病毒与疾病的相关性,这将仍然是一个具有挑战性的任务和未来临床研究的重点。
 
  病毒组研究的分析流程主要包括病毒颗粒的分离纯化,病毒DNA的提取、测序、分类、注释,病毒基因组的组装、相似性分析、新型病毒鉴定等(图2)。RNA病毒可以反转录成DNA再进行扩增,也可以采用全转录组扩增法(whole transcriptome amplification,WTA)。
 
  目前,病毒组数据库正在发展壮大,常见的数据库包括欧洲生物信息协会数据库(European bioinformatics institute database,EBI)、以及NCBI Viral Database等。病毒序列的分类注释完成后,需要对病毒组的多样性进行表征。病毒组的相似性可视化表征方法包括主成分分析(principal coordinate analysis,PCA)和空间聚类(hierarchical clustering)等多维还原方法。
 
  CD-Hit-est是常用的病毒序列聚类方法,CD-Hit聚类表可以用来分析样品的α多样性和β多样性。由于大多数病毒组数据与已有的数据库缺乏相似性,病毒组的非相似性分析方法也得到了发展,如重叠谱噬菌体群(phage communities from contig spectrum,PHACCS)。
 
 
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